检验医学与临床２０１７年９月第１４卷第１７期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．１７ ・・ ２５２３ ・ 论 著・ ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪进行临床酵母菌鉴定的方法学评价 李艳君，董蓉，赵强元△ （中国人民海军总医院检验科，北京１０００４８） 摘 要：目的 探讨ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱仪用于临床酵母菌鉴定的优越性，为临床真菌感染提供早期诊断、治疗的依据。 方法 收集该院２０１５年８月至２Ｏ１６年３月Ｉ临床分离酵母茵２０６株，分别用ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪、ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ微生物鉴定 仪和显色培养法进行鉴定，以内转录间区序列测序结果为最终确认结果。比较ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪、ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ微生物鉴 定仪和显色培养法鉴定的准确性。结果 ３种方法鉴定酵母茵的准确率分别为ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪８２．５ ，显色培养法 ６７．０ ，ＭＡＬＤＩ—Ｔ０Ｆ质谱仪９２．７ 。ＭＡＬＤＩ—Ｔ０Ｆ质谱仪与ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪比较，差异有统计学意义（Ｐ一０．００６）， ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪与显色培养法比较，差异有统计学意义（Ｐ一０．００１）。结论 ＭＡＬＤｌ＿ＴＯＦ质谱仪与ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定 仪、显色培养法相比，具有快速、操作简便、结果准确等优点。 关键词：ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱仪； 酵母茵； 内转录间区测序 ＤｏＩ：ｌ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１７．１７．０１０ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—９４５５（２Ｏｉ７）１７－２５２３—０３ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ ｆｏｒ ｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｙｅａｓｔ ＬＩ Ｙａｎｊｕｎ，ＤＯＮＧＲｏｎｇ，ＺＨＡＯ Ｑｉａｎｇｙｕａｎ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎａｖｙ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｐｒｏｂｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ ｏｆ ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ ｉｎ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｙｅａｓｔ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｕｎｇａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２０６ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉ ｔａ１ ｆｒｏｍ Ａｕｇｕｓｔ ２０ １ ５ ｔｏ Ｍａｒｃｈ ２０ １ ６ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ，ＶＩＴＥＫ２ ｃｏｍｐａｃｔ ｍｉｃｒｏｂｉ— ａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｃｕｌｔｕｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ ｏｎｅ．Ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｉｅｓ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｙｅａｓｔ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｒａｔｅｓ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｙｅａｓｔ ｗｅｒｅ ８２．５ ｆｏｒ ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ，６７．０ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ９２．７ ｆｏｒ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ａｎｄ ＶＩＴＥＫ２ ｃｏｍｐａｃｔ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ一０．００６），ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＡＬ— ＤＩ－ＴＯＦ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＝０．００１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ ｍｉ— ｃｒｏｂｉａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ＭＡＩ ＤＩ ＴＯＦ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ ｈａｓ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｒａｐｉｄｎｅｓｓ，ｓｉｍｐｌｅ ｏｐｅｒ— ａｔｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｔｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ； ｙｅａｓｔ； ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ 近年来，由于广谱抗菌药物、免疫抑制剂、糖皮质激素等药 物的广泛应用和因器官移植、肿瘤化疗等造成免疫损伤患者的 增多，真菌感染呈持续性上升趋势。尤其是近几年，白色假丝 酵母菌感染占血源性真菌感染的半数以上，其病死率高达 ４５ ～７５ ，非白色假丝酵母菌的感染比例也在升高ｃ１］。因 此，真菌的早期诊断和治疗，对于提高患者治愈率，降低病死率 仪及配套基质液（布鲁克公司）、ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生 物鉴定仪及ＹＳＴ鉴定卡（法国梅里埃公司）、Ｃｈｒｏｍａｇａｒ显色 培养基（法国科马嘉公司）、沙堡弱琼脂培养基（法国梅里埃公 司）、酵母基因组ＤＮＡ提取试剂盒及聚合酶链反应（ＰＣＲ）相 关试剂（Ｑｉａｇｅｎ公司）。 １．３方法 具有一定的临床意义。然而，对于酵母菌的鉴定，传统上多采 用基于生化反应和显色培养的方法，两种方法在酵母菌的鉴定 中都存在耗时长、鉴定能力不足等问题。近年来随着微生物鉴 定技术的飞速发展，ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪应运而生，在临床感 染病原菌的鉴定中应用日益广泛。许多报道显示其在多种细 菌的鉴定中与传统方法相比，具有快速、准确的特点，但在真菌 中的研究还鲜有报道。因此，本研究探讨了ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质 １．３．１ 真菌分离培养 所有菌株标本均接种在沙堡弱琼脂培 养基上，于２８℃培养箱恒温培养２～３ ｄ，每天观察菌株生长状 况及菌落形态，长出单个菌落后对菌落进行次代纯培养。 １．３．２ ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪对纯培养菌株进行革兰染 色，明确其为酵母菌，挑取纯培养菌落，用０．４５ 无菌氯化钠 溶液配制成麦氏浊度为１．８～２．２的菌悬液，装载卡片上机鉴 定，１８～２４ ｈ记录实验结果。 谱仪用于临床常规酵母菌鉴定的优越性，为临床真菌感染提供 早期诊断、治疗的依据。现报道如下。 １材料与方法 １．３．３显色培养鉴定其判定方法见表１。 将纯培养菌株接种在Ｃｈｒｏｍａｇａｒ显色 培养基，２５～３ｏ℃培养４８ ｈ观察菌落的颜色，进行菌种鉴定， １．３．４ ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪 根据ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪标准 操作流程，取甲酸萃取法制备的标本１ Ｉ ，加１ Ｌ基质液，自 然晾干后上机测定。ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪结果判读：根据Ｂｉｏ— ｔｙｐｅｒ软件得分标准（＞２．０的菌株在“种”水平上的鉴定被完 通信作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈａｏｑｉａｎｇｙｕａｎｏＯ１＠１２６．ｃｏｒｎ。 １．１菌株来源 收集本院２０１５年８月至２０１６年３月临床分 离酵母菌２０６株。菌株来源于血液、痰液、尿液、分泌物、脓汁、 脑脊液、粪便和伤口拭子等。 １．２仪器与试剂 主要仪器与试剂包括ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱 作者简介：李艳君，女，副主任医师，主要从事病原微生物鉴定与溯源研究。 检验医学与临床２０１７年９月第１４卷第ｌ７期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．１７ 全接受；得分在１．８～２．０的菌株在“种”水平上的鉴定已经足 够准确；得分＞１．７菌株在“属”的水平上被接受），记录鉴定 结果。 表１ 显色培养结果判定表 初筛假丝酵母菌属 菌落颜色及直径 白色假丝酵母菌 绿色、翠绿色（直径约２ ｍｍ） 热带假丝酵母菌 蓝灰色、铁蓝色（直径约１．５ ｒａｍ） 克柔假丝酵母菌 粉红色（模糊、有微毛，菌落较大，直径４～５ ｍｍ） 光滑假丝酵母菌 紫色（直径约２ ｒａｍ） 其他假丝酵母菌 白色 １．３．５ 内转录间区（ＩＴＳ）序列测序真菌ＤＮＡ通过酵母基 因组ＤＮＡ提取试剂盒（Ｑｉａｇｅｎ公司）提取，ＰＣＲ扩增引物、反 应条件及反应体系见参考文献Ｅｅ］。扩增引物为ＩＴＳ３（５．＿ＧＣＡ ＴＡＴ ＣＡＡ ＴＡＡ ＧＣＧ ＧＡＧ ＧＡ一３ ）和ＩＴＳ４（５ 一ＧＣＡ ＴＣＧ ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＡＣ ＧＣＡ ＧＣ－３ ）。ＰＣＲ产物测序后在美国国家 生物技术信息中心网站进行比对，明确菌种鉴定结果。 １．４判断标准 当ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪、ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 鉴定仪和显色培养法三者鉴定结果一致时，将此鉴定结果作为 最终确认菌种结果；当ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪与ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｒｎ— ｐａｃｔ鉴定仪二者鉴定结果不一致，以ＩＴＳ序列测序结果为确认 结果。对３种方法获得的鉴定结果进行统计分析。 １．５统计学处理 采用ＳＰＳＳ１９．０统计软件进行统计分析， 计数资料以率表示，组问比较采用ｙ 检验，以Ｐ＜０．０５为差异 有统计学意义。 ２结 果 ２．１ 显色培养法鉴定结果 ２０６株酵母菌经显色鉴定，判断 正确１２８株，准确率为６７．０ 。见表２。 表２ ２０６株酵母菌显色培养法鉴定结果 注： 表示显色为白色、不能鉴定的菌株结果 表３ ２０６株酵母菌ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪鉴定结果 菌株 菌株 白色假丝酵母菌 １１５ １１３（９８．３） 酿酒酵母菌 ２ ２（１００．Ｏ） 热带假丝酵母菌 ２６ ２５（９６．２） 朊假丝酵母菌 １ ｏ（ｏ．０） 光滑假丝酵母菌 ２Ｏ １９（９５．ｏ） 角膜假丝酵母菌 １ ｏ（ｏ．０） **滑假丝酵母菌 ９ ６（６６．７） 克勒克酵母菌 １ ０（０．０） 克柔假丝酵母菌 ３ ３（１００．Ｏ） 部威假丝酵母菌 １ ｏ（ｏ．ｏ） 葡萄牙假丝酵母菌 ３ ２（６６．７） 乳酒假丝酵母菌 １ ０（０．０） 西弗射盾子囊霉菌 ３ ０（０．０） 其他 ２０ ｏ（ｏ．Ｏ） 注： 表示ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪不能鉴定的结果 ２．２ ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪鉴定结果 ２０６株酵母菌经 ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃ鉴定仪鉴定，判断正确１７０株，准确率为 ８２．５ 。见表３。 ２．３ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ质谱仪鉴定结果 ２０６株酵母菌经ＭＡＩ 一 ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪鉴定，判断正确１９１株，准确率为９２．７ 。见 表４。 表４ ２０６株酵母菌ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪鉴定结果 菌株 菌株 鬻 白色假丝酵母菌 １２１ １１９（９８．３） ＣａＭｉｄａ ｍｅｔａｐｓｉｌｏｓｉｓ １ １（１００．Ｏ） 热带假丝酵母菌 ２８ ２６（９２．９） 季也蒙毕赤酵母菌 １ １（１００．Ｏ） 光滑假丝酵母菌 ２６ ２５（９６．２） Ｃａｎｄｉｄａ ｏｒｔｈｏｐｓｉｌｃｄｓ １ ｏ（ｏ．Ｏ） **滑假丝酵母菌８ ８（１００．Ｏ） 东方伊萨酵母菌 １ １（１００．Ｏ） 克柔假丝酵母菌４ ３（７５．Ｏ） 发皮安假丝酵母菌 １ ０（旺Ｏ） 葡萄牙假丝酵母菌 ３ ２（６６．７） 高里假丝酵母菌 １ ０（旺Ｏ） 酿酒酵母菌 ２ ２（１００．Ｏ） 菌膜假丝酵母菌 １ Ｏ ０） 粗壮假丝酵母菌 １ ｏ（ｏ．。） 马克斯克鲁维酵母菌 １ １（１００．０） 阿萨希丝孢酵母菌 １ １（１ＯＯ．０） 仙人掌有孢汉逊酵母菌 １ １（１００．０） 乳酒酵母菌 １ ｏ（ｏ．Ｏ） 其他 ２ ｏ（ｏ．０） 注： 表示ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪不能鉴定的结果，包括１株无峰，１ 株得分＜１．７ ２．４ ＩＴＳ测序结果对于ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪和ＭＡＬ— ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪鉴定结果不一致的菌种，进行ＩＴＳ测序，以测 序结果为标准，比较鉴定结果的准确率，见表５。 表５ ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪和ＭＡＩ ＤＩ－ＴＯＦ质谱仪 鉴定结果的比较［ｎ（ ）］ ２．５ ３种方法鉴定２０６株酵母菌准确率的比较 ＭＡＬＤＩ— ＴＯＦ质谱仪与ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪准确率比较，差异有 统计学意义（Ｐ一０．００６），ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱鉴定仪与显色培养 法准确率比较，差异有统计学意义（Ｐ：０．００１）。 ３讨 论 酵母菌和类酵母菌引起的严重感染不断增加，尤其是在免 疫力低下的患者中尤为突出。每年全世界约有７ ２８０万酵母 检验医学与临床２０１７年９月第１４卷第１７期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．１７ 菌的条件致病患者，其病死率为３３．９ ０ ］。近年来不同种类 ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪鉴定技术是一种快速、准确，高通量的技术，随 的抗真菌药物被临床应用，因此寻找快速、可靠的鉴定方法成 为了治疗真菌感染的关键问题。 目前国内临床微生物实验室鉴定酵母菌的方法较多，显色 着质谱数据的建立和不断完善，ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪在各类感 染病原体的快速检测方面的应用将会更加广泛。 参考文献 培养法仅能区分白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝 酵母菌、克柔假丝酵母菌这４种常见的酵母菌，培养时间长，一 般２４ ｈ左右且结果判断易受个人主观因素的影响。基于生化 反应原理的ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪，所需纯培养菌量较大， 数据库中可供比对的菌种仅为３Ｏ多种，鉴定时长，需要１８～ ２４ ｈ，且影响因素较多。随着蛋白质谱技术的发展，ＭＡＩ ＤＩ－ ＴＯＦ质谱仪在临床微生物鉴定领域得到越来越广泛的运 赖斌，熊梅，杨凌志，等．血液科感染患者致病菌的临床资 料分析［Ｊ］．现代生物医学进展，２０１３，１３（２２）：４３６８—４３７２． Ｓｃｈｏｃｈ ＣＬ，Ｓｅｉｆｅｒｔ ＫＡ，Ｈｕｈｎｄｏｒｆ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｓｏ— ｍａｌ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ）ｒｅｇｉｏｎ ａｓ ａ Ｕｎｉｖｅｒ— ｓａｌ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ Ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１２，１０９（１６）：６２４１—６２４６． 用 ］，其快速、准确、高通量和成本低廉的优点在感染的诊断中 发挥了重要作用。 ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪在临床细菌鉴定的应用报道很 多【６。］，但用于真菌鉴定的评价较少Ⅲ８棚，本研究应用ＭＡＬＤＩ－ Ｐｉｎｔｏ Ａ，Ｈａｌｌｉｄａｙ Ｃ，Ｚａｈｒａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍａｔｒｉｘ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ Ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｉ— ｄｅｎｔｉｆｉｅａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ ｉｓ ｃｏｎｔｉｎｇｅｎｔ ｏｎ ｒｏｂｕｓｔ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒａ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１１，６（１０）：ｅ２５７１２． ＴＯＦ质谱仪对２０６株临床分离酵母菌进行鉴定，与以往常用 的显色培养法和ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪进行了比较，以评 刘磊，刘彬，李玉，等．呼吸道白色假丝酵母菌感染的临床 早期诊断厂Ｊ］．中国老年学杂志，２０１５，３５（３）：８０９—８１０． 宗玉龙，曹源，褚芳波，等．基质辅助激光解吸电力飞行时 价ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪进行酵母菌鉴定的准确性。３种方法 中，显色培养法鉴定的总准确率为６７．０ ，只能鉴定常见的４ 二Ｊ］ ］ ］ ］ ］种酵母菌，对白色假丝酵母菌的准确性最好，高达９６．８ ，而 间质谱在临床微生物检测和鉴定中的应用［Ｊ］．医 ］ ］ｌ卜 ］ 学，２０１４，２５（２Ｏ）：９５８—９６０． ］ 对白色假丝酵母菌以外的鉴定错误率高（表２），需要采用其他 方法进行补充鉴定。ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪总准确率为 鲍春梅，宋新爱，崔恩博，等．ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ—ＭＳ鉴定宋内 志贺菌的临床应用［Ｊ］．传染病信息，２０１４，３７（３）：１５２— １５６． ８２．５ ，虽能准确鉴定大部分临床分离酵母菌，但对不常见的 菌株的鉴定能力有限，本研究２０６株菌中有２Ｏ株没有得到鉴 定结果（表３）。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱仪的总准确率达９２．７ ，不 刘瑛，俞静，陈峰，等．ＭｉｃｒｏｆｌｅｘＴ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ和 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生物分析系统对肠杆菌科细 仅能鉴定临床常见酵母菌，对于少见菌的鉴定能力较强（表 ４）。通过与ＩＴＳ的测序结果比较，ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ质谱仪准确率 高于ＶＩＴＥＫ２ Ｃｏｍｐａｃｔ鉴定仪和显色培养法，差异均有统计 学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。 菌鉴定能力的比较［Ｊ］．检验医学，２０１５，３０（２）：１２２—１２７． 黄声雷，胡必杰，陈蓉，等．两种ＭＡＬＤＩ－Ｔ０Ｆ ＭＳ系统快 速鉴定血培养中白假丝酵母菌以外酵母样真菌［Ｊ］．检验 医学，２０１５，３０（２）：１２８—１３１． Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ＬＧ，Ｄｒａｋｅ ＳＫ，Ｓｈｅａ ＹＲ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｔｒｉｘ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ—Ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ 本研究２０６株菌有２株没有得到ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ质谱仪的 鉴定结果，１３株与ＩＴＳ测序比对结果不正确，考虑可能原因为 数据库中的质谱图有限，且库中质谱图大部分为标准菌株。随 着笔者在后续研究中不断完善和补充数据库资源，相信ＭＡＬ— ＤＩ－ＴＯＦ质谱仪将在临床酵母菌以及其他各种细菌的鉴定中 发挥更大的作用。 ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｍｐｏｒ— ｔｅｎｔ ｙｅａｓｔ ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，４８（１０）： ３４８２—３４８６． 综上所述，ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱仪与传统的微生物鉴定方法 比较，具有快速、简便、准确等优点。本研究结果表明，ＭＡＬ－ （上接第２５２２页） （收稿日期：２０１７－０３－１５ 修回日期：２０１７ Ｏ４—２２） ｄｉｃｔｉｎｇ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｒｏｋｅ：ａ ｐｌａｃｅｂｏ ｇｒｏｕｐ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａ１ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ［６］Ｋａｍａｌｉａｎ Ｓ，Ｍｏｒａｉｓ ＬＴ，Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ ＳＲ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｔ ｌｅｎｇｔｈ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ ｉｎ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｏｋｅ Ｓｔｒｏｋｅ ｒｔ ＰＡ Ｓｔｒｏｋｅ Ｔｒｉａｌ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０００，５５（７）： ９５２—９５９． ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｔｒａ—Ａｒｔｅｒｉａｌ ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，２０１３， ４４（１２）：３５５３—３５５６． ［１Ｏ］Ｗａｈｌｇｒｅｎ Ｎ，Ａｈｒｎｅｄ Ｎ，Ｅｒｉｋｓｓｏｎ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｂｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｕｔｃｏｍｅ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ ａｎｄ ａｄｊ ｕｓｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｉｎ ｏｕｔｃｏｍｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｔｏ ｂａｓｅｌｉｎｅ ｄａｔａ ｐｒｏｆｉｌｅ ｉｎ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌｓ：Ｓａｆｅ Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ ｉｎ ［７］Ｍｉｓｈｒａ ＳＭ，Ｄｙｋｅｍａｎ Ｊ，Ｓａｊｏｂｉ ＴＴ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｒｅｐｅｒｆｕ— ｓｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ＩＶ ｔＰＡ ａｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＣＴＡ ｃｌｏｔ ｃｈａｒ— ａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ，２０１４，３５（１２）：２２６５— ２２７２． Ｓｔｒｏｋｅ－ＭＯｎｉｔｏｒｉｎｇ ＳＴｕｄｙ（ＳＩＴＳ－ＭＯＳＴ）［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ， ２００８，３９（１２）：３３１６—３３２２． ［８３ Ｋｉｍｕｒａ Ｋ，Ｉｇｕｃｈｉ Ｙ，Ｓｈｉｂａｚａｋｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．ＩＶ ｔ—ＰＡ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｓｔｒｏｋｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕ— ｒｏｌ Ｓｃｉ，２００９，２７６（１／２）：６—８． （收稿Ｅｔ期：２０１７－０３—１９ 修回日期：２０１７－０４—２６） ［９］Ｆｒａｎｋｅｌ ＭＲ，Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ ＬＢ，Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅ—
