３０７６ 利Ｅ医药２０１３年１０月第３５卷第２０期Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，Ｖｏｌ ３５ Ｏｃｔ Ｎｏ．２０ ・ｄｏｉ：１０．３９６９ｄ．ｉｓｓｎ．１００２—７３８６．２０１３．２０．０１５ 论著・ 精神症患者多巴胺Ｄ２受体和多巴胺转运体 基因表达水平与临床症状的相关性分析 杨淑珍 【摘要】 目的研究精神症患者外周血淋巴细胞多巴胺Ｄ２受体（ＤＲＤ２）、多巴胺转运体（ＤＡＴ） 基因表达与临床症状之间的关系。方法采用荧光定量ＰＣＲ检测治疗前后不同时间段患者外周血淋巴细 胞ＤＲＤ２、ＤＡＴ ｍＲＮＡ的表达量，并在不同治疗时间段对患者进行ＰＡＮＳＳ评分，分析两者之间的相关性。 结果 治疗组与对照组在治疗前、第１周、第３周、第５周后ＰＡＮＳＳ总分、ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ表达及ＤＡＴ ｍＲＮＡ 的表达总体存在差异。治疗组在接受治疗３、５周后ＰＡＮＳＳ总分、ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ表达及ＤＡＴ ｍＲＮＡ表达低 于治疗前（Ｐ＜０．０５）；ＤＲＤ２基因表达与ＰＡＮＳＳ总分和阳性症状呈正相关（ｒ值分别为０．４１６与０．５６７，Ｐ ＜０．０１），ＤＡＴ基因表达与ＰＡＮＳＳ总分和精神病理症状呈负相关（ｒ值分别为一０．４４７与一０．５０８，Ｐ＜ ０．０１）。结论ＤＲＤ２、ＤＡＴ基因的表达水平与临床症状之间存在相关性。 【关键词】 精神症；ＤＲＤ２；ＤＡＴ；ｍＲＮＡ；ＰＡＮＳＳ；相关性 【中图分类号】 Ｒ ７４９．３ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００２—７３８６（２０１３）２０—３０７６—０２ 精神症是一种以行为、情感、思维等之间的协调性降 低，精神活动与现实脱离为主要特征的精神性疾病，特别是随 着现在人们工作、生活压力的增强，出现了发病率高、治愈难、 １．２方法 １．２．１ ＰＡＮＳＳ评分：询问病史、精神检查，所有患者均采用抗 精神药物治疗，并分别于治疗前、治疗１周、治疗３周、治 疗５周后完成对精神症患者的ＰＡＮＳＳ评定。研究开始阶 段，笔者接受ＰＡＮＳＳ专项培训，考核成绩优秀。 １．２．２血样采集：分别于治疗前、治疗１周、治疗３周、治疗５ 周后早晨采集患者及健康对照组空腹血液标本。均采用ＥＤＴＡ 普遍性等特点。目前对精神症发病原因和机制还未完全 阐明，但其患者中常出现典型的多巴胺系统异常…。因 而，对多巴胺生物合成、代谢、应答等相关受体或配体的研 究成为了该病的研究重点。有研究发现精神症患者外周 血淋巴细胞ＤＲＤ１～ＤＲＤ５、ＤＡＴ表达较正常人有所增加 ｊ，但 抗凝管，每次采集５ｍｌ，于４℃冰箱保存（尽量缩短保存时间） １．２．３总ＲＮＡ的提取及反转录：依次向样品中加入适量的 其与患者的临床表现是否存在着相关性目前不是很清楚。因 而，研究ＤＲＤ１一ＤＲＤ５、ＤＡＴ表达变化与临床症状的关系不仅 ＴＲＩｚｏｌ裂解细胞，离心，加入氯仿萃取，离心，加入异丙醇沉淀， 加入适量的ＤＥＰＣ水溶解，用核酸蛋白检测仪和琼脂糖凝胶电 泳分别检测其纯度和完整性，根据ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ ＩＩ Ｆｉｒｓｔ—Ｓｔｒａｎｄ ｃＤ— ＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ（北京全式金生物技术有限公司）试剂盒 可以对临床患者实施动态监察，还能为精神症患者的治疗 提供参考。本研究通过对不同治疗时间段的精神症患者 外周血淋巴细胞ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达的动态变化、ＰＡＮＳＳ 评分变化及其相互关系的研究，以期寻找外周血淋巴细胞 ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达与精神患者临床症状的关系，为临 床治疗提高试验参考。 １资料与方法 １．１一般资料本次研究共收集２０１０年６月至２０１２年６月 合，采用随机引物按说明书要求合成ｃＤＮＡ。 １．２．４ 目的基因的扩增：采用ＴｒａｎｓＳｔａ￣Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ 试剂盒（北京全式金生物技术有限公司），按说明要求加入ｃＤ— ＮＡ，引物和适量的水，在ＡＢＩ７５００扩增仪上扩增，条件为９５℃ 预变性６０ Ｓ、９５℃变性１０ Ｓ、５６℃１５ Ｓ、７２℃３５ Ｓ、４２个循环。采 用内参基因的ＡＣＴ法进行ＤＡＴ、ＤＲＤ２基因的定量分析。其 ＤＲＤ２引物Ｌｅｆｔ：５－ＧＧＡＧＧＴＧＧＴＡＧＧＴＧＡＧＴＧＧＡ一３，Ｒｉｇｈｔ：５一 于我院住院治疗的患者２１０例，其中男１１２例，女９８例；年龄 １６—５５岁；病程１—３６个月。人选患者均符合中国精神障碍分 类与诊断标准第３版（ＣＣＭＤ一３）精神症诊断标准，排除 ＣＣＭＤ一３其他精神疾病，器质性病变、自身免疫、内分泌性疾病 和妊娠，哺乳期女性等患者，近期未出现急慢性感染或炎症，未 ＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＧＡ一３，扩增产物大小为２２０ｂｐ；ＤＡＴ 引物Ｌｅｆｔ：５一ＴｒＣＡＴＣＡＴＣＴＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣ一３，Ｒｉｇｈｔ：５一ＡＡＣＡＧＧ— ＧＡＣＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＴ一３，扩增产物大小为２１５ｂｐ；ＧＡＰＤＨ引物 Ｌｅｆｔ：５－ＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡｑＴＩ＇ＧＧＴＣＧＴ一３．Ｒｉｇｈｔ：５－ＧＡＣＡＡＧＣＴＩ＇Ｃ— 服用免疫抑制剂、抗生素类药物等。对照组为公开招募的健康 人群２０例，治疗组与健康对照组间基本资料未见差异，组间均 衡可比。经新乡医学院第二附属医院伦理委员会备案审查，批 准开展本项研究。 ＣＣＧＴＴＣＴＣＡＧ一３，扩增产物大小为１８５ｂｐ。 １．３统计学分析应用ＳＰＳＳ １７．０统计软件，治疗过程中 同 治疗时间之间比较采用重复测量数据的方差分析；组内每两时 间点比较采用配对ｔ检验，同时校正检验水准 。ＤＲＤ２、ＤＡＴ 与ＰＡＮＳＳ评分之间采用Ｐｅａｒｓｏｎ线性相关性分析，Ｐ＜０．０５为 差异有统计学意义。 作者单位：４５３００２河南省新乡市，新乡医学院第二附属医院精 神科 河北医药２０１３年１Ｏ月第３５卷第２０期２结果 Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，￣ｏｌ ３５ Ｏｃｔ Ｎｏ．２０ ３０７７ 表３ ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达与ＰＡＮＳＳ评分相关性分析 ２．１不同治疗时间段患者的ＰＡＮＳＳ评分情况经检验，治疗 ／７，＝２１０ 组与对照组在治疗周期内阳性症状得分、阴性症状得分、一般 病理得分以及ＰＡＮＳＳ总分均存在差异（Ｐ＜０．０１）。治疗前、 治疗１周治疗３周和５周后对患者进行ＰＡＮＳＳ评分发现，患者 的阳性症状得分、阴性症状得分、一般病理得分以及ＰＡＮＳＳ总 分在治疗Ｉ周后较治疗前无明显降低。患者的阳性症状得分、 阴性症状得分、一般病理得分以及ＰＡＮＳＳ总分在治疗３周和５ 周后较治疗前均显著降低（Ｐ＜０．０５），说明随着治疗的进行 被多巴胺激活后，会通过细胞表面Ｇ蛋白偶联受体将胞外信号 转移到胞内，抑制胞内ｃＡＭＰ酶的活性，抑制ｃＡＭＰ产生或通过 其它途径促进Ｋ 的释放和Ｃａ２ 内流使神经细胞极化方式发 ＰＡＮＳＳ评分逐渐降低，境况好转。见表１。 表１ 不同治疗时间段患者ＰＡＮＳＳ各项评分情况 ｎ＝２１０． ± 注：与治疗前比较。 Ｐ＜０．０ｌ ２．２不同治疗时间段患者ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达情况经检 验，治疗组与对照组在治疗周期内外周血淋巴细胞ＤＲＤ２和 ＤＡＴ基因表达均存在差异（Ｐ＜０．０５）。对患者外周血淋巴细 胞ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达情况在治疗前、治疗１周治疗３周和 ５周后进行检测发现随着治疗的进行ＤＲＤ２基因表达下调，且 ＤＲＤ２基因表达在治疗３周和治疗５周时显著低于治疗前（Ｐ ＜０．０５）；随着治疗的进行ＤＡＴ基因表达逐渐上调，且ＤＡＴ基 因表达在治疗５周时显著高于治疗前（Ｐ＜０．０５）。见表２。 表２不同治疗时间段患者ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因的表达情况 ｎ＝２１０．面±ｓ 注：与对照组比较． Ｐ＜０．０５， ＜０．０１ ２．３ ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达水平与ＰＡＮＳＳ评分相关性分析 对精神症患者ＤＲＤ２和ＤＡＴ基因表达水平与ＰＡＮＳＳ评分 进行相关性分析表明，ＤＲＤ２基因表达与ＰＡＮＳＳ总分呈正相关 （ｒ＝０．４６１，Ｐ＜０．０１），与阳性症状呈正相关（ｒ＝０．５６７，Ｐ＜ ０．０１），而与阴性症状和精神病理症状未见相关（Ｐ＞０．０５）； ＤＡＴ基因表达水平与ＰＡＮＳＳ总分呈负相关（ｒ＝一０．４４７，Ｐ＜ ０．Ｏ１），与精神病理症状呈正相关（ｒ＝一０．５０８，Ｐ＜０．０１），而 与阳性症状和阴性症状未见相关（Ｐ＞０．０５）。见表３。 ３讨论 目前中枢神经系统ＤＡ功能亢进或异常的“多巴胺功能亢 进假说”被认为是精神症发病的主要机制。当ＤＲＤ２受体 生改变来发挥作用 。多巴胺转运体（ＤＡＴ）作为运输ＤＡ横 跨突触前膜的载体蛋白对多巴胺持续作用时间及其重摄取过 程起决定作用。已有研究表明ＤＡＴ功能失调会导致脑内多巴 胺调节失衡，从而导致帕金森病、精神症及药物依赖等多 种神经精神疾病 Ｊ，因而对ＤＡＴ功能失调机制的研究有助于 临床加强对精神症患者的诊断和治疗。本次研究结果，不 仅呈现了对精神患者给予抗精神病药物治疗前和治疗后 不同时间段ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ的表达情况和ＰＡＮＳＳ评分的动态变 化，对临床治疗药物使用具有指导意义；而且发现ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ 的表达与ＰＡＮＳＳ总分和阳性症状评分呈正相关而与阴性症状 及精神病理症状评分无相关性，我们初步推定：ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ的 表达与患者出现的幻觉、思维散漫、猜疑和妄想等严重程度有 关，而与患者出现的情感淡漠、意志缺乏、注意行为障碍、记忆、 认知功能等关系不大。这与张会芳等 发现的精神症阳 性症状患者ＤＲＤ２受体的表达增加，阴性症状患者ＤＲＤ２受体 表达降低或不变相一致。林嗣萃等 采用Ａｍｐ—ＦＬＰ技术研究 多巴胺转运体基因与精神症的关系时发现，对于阳性症状 和阴性症状的患者ＤＡＴ１基因多态性与健康对照组相比未见 差异。我们的研究也发现ＤＡＴ ｍＲＮＡ的表达与ＰＡＮＳＳ总分和 精神病理症状评分存在着负相关性，而与阳性症状和阴性症状 则未见关联。说明外周血中ＤＡＴ ｍＲＮＡ的表达与患者的睡眠、 行为障碍、记忆、认知功能等临床症状有着直接的联系。 综上，精神症患者接受抗精神病药物治疗后，随着时 间的推移外周血中淋巴细胞ＤＲＤ２ ｍＲＮＡ的表达与ＰＡＮＳＳ总 分和阳性症状呈负相关，而ＤＡＴ ｍＲＮＡ的表达与ＰＡＮＳＳ总分 和精神病理症状评分呈负相关，为临床对精神症患者的药 物治疗提供了一定的参考依据。 参考文献 １ Ｔｏｓｔ Ｈ，Ａｌａｍ Ｔ．Ｍｅｔｅｒ—Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇ Ａ．Ｄｏｐａｍｉｎｅ ａｎｄ ｐａｙｃｈｏｓｉｓ：Ｔｈｅｏｒｙ， ｐａｔｈｏｍｅｃｌｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．Ｎｅｕｍｓｅｉ Ｂｉｏｂｅｈａｖ Ｒｅｖ， ２０１０，３４：６８９－７００． ２ Ｘｕａｎ Ｊ，Ｚｈａｏ Ｘ，Ｈｅ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｏｐａｍｉｎｅＤ３ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＤＲＤ３）ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｎ ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ａ ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ— ｉｃ ｓｔｕｄｙ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｅｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００８，３３：３０５－３１１． ３张海生，谢健，张顺泉，等．多巴胺受体Ｄ２型基因启动子区ＣｐＧ岛 甲基化状态与Ｉ型和Ⅱ型精神症的关联．中国神经精神疾病杂 志，２０１２，３８：４３９－４４１． ４吴光晓，苏瑞斌，李锦．多巴胺转运体在精神兴奋剂依赖中的作用． 中国药理学通报，２０１０，２６：１４１．１４３． ５张会芳，袁国桢，刘新民．精神症患者外周多巴胺Ｄ２受体及转 运体ｍＲＮＡ的表达．皖南医学院学报，２０１ １，３０：３９４－３９６． ６林嗣萃，江三多，韩孝龙，等．多巴胺转运体基因与精神症．四川 精神卫生，２０００，１３：７３－７５． （收稿日期：２０１３—０５—３０）
