山西医科大学学报（Ｊ Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ ｉｖ １ ２０ Ｑ生！旦： ｉ ・３３・ 气相色谱法测定帕米膦酸二钠中的有机溶剂残留量 张慧兰， 乔学文， 申云飞 （山西康宝生物制品股份有限公司，长治０４６０１１） 摘要： 目的 建立气相色谱法测定帕米膦酸二钠中甲醇、氯苯的残留量。 方法采用ＤＩＭ—ｗ 毛细管柱（３０ ｍ ｘ０．３２ Ｂｉｎ，０．５０“ｍ）；载气为氮气；以５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺为溶剂；柱温４０℃，保持５ ｍｉｎ，以２０％／ｍｉｎ升温至１８０℃，保持 １ ｍｉｎ；进样口温度２４０℃；检测器温度２５０℃（ＦＩＤ）。 结果 甲醇在６２．４—４９９．２ ｍｅ，／ｍｌ的浓度范围内线性关系良好，ｒ＝ ０．９９９ ２（ｎ：５），检测限为０．４ ｎｇ，回收率为９８．９５％（ＲＳＤ：１．１２％）；氯苯在１１．６—５８．０ ｍｇ／ｍｌ的浓度范围内线性关系良好， ｒ＝０．９９９ ４（ｎ＝５），检测限为０．２ ｎｇ，回收率为９８．８２％（ＲＳＤ：１．４０％）。 结论氯苯的残留量测定。 关键词： 帕米膦酸二钠； 气相色谱法； 有机溶剂残留量 中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标志码：Ａ 文章编号： １００７—６６１１（２０１０）０１—００３３—０３ 气相色谱法可用于帕米膦酸二钠中甲醇、 Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｉｎ ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｂｙ ＧＣ ＺＨＡＮＧ Ｈｕｉ—ｌａｎ，ＱＩＡＯ Ｘｕｅ—ｗｅｎ，ＳＨＥＮ Ｙｕｎ． （Ｓｈａｎｘｉ Ｋａｎｇｂａｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ ＣＯ．，Ｌｔｄ，Ｃｈａｎｇｚｈｉ ６０Ｊ Ｊ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ，ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ．ｉｎ ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ ｄｉｓｏｄｉｕｍ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＤＩＭ—Ｗａｘ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｏｌｕｍｎ ａｎｄ ＦＩＤ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｗｉｔｈ ５Ｏ％Ｎ，Ｎ—ｄｉｍｅ— ｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ ａｓ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｔ ｔｈｅ ｏｖｅｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ４Ｏ℃ｆ０ｒ ５ ｍｉｎ．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｐｒｏｇｒａｍｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ ｌ ８０℃ａｔ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ２０℃／ｍｉｎ ａｎｄ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ｌ ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｐｏｒｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ２４０℃．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ２５０℃． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｉｎ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ａｔ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ６２．４—４９９．２ ｍｇ／ｍｌ ａｎｄ ｌ１．６—５８．０ ｍｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｗｅｒｅ ９８．９５％（ＲＳＤ＝１．１２％）ａｎｄ ９８．８２％（ＲＳＤ＝１．４０％），ｒｅｓｐｅｃ— ｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｗｅｒｅ ０．４ ｎｇ ａｎｄ ０．２ ｎｇ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｅｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｉｎ ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ ｄｉｓｏｄｉｕｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ ｄｉｓｏｄｉｕｍ； ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； ｒｅｓｉｄｕａｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅ 帕米膦酸二钠（ＡＰＤ）为新一代双膦酸盐类骨 代谢改善剂，在对骨质生长和矿化无明显不良影响 帕米膦酸二钠原料药（山西康宝生物制品股份 有限公司生产，批号０４０４０１，０４０４０２，０４０４０３），甲 的剂量下，有很强的抑制骨质再吸收作用，国外已用 于恶性肿瘤的高钙血症、溶骨性骨转移、佩吉特氏 病、骨质疏松症及多发性骨髓瘤的治疗或预防，对恶 醇、氯苯、Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）均为分析纯。 ２方法与结果 ２．１色谱条件与系统适用性实验 色谱柱ＤＩＭ－ Ｗａｘ毛细管柱（３０ Ｉｌｌ×０．３２ ｍｍ，０．５０ ｔｘｍ）；进样口 温度为２４０℃；ＦＩＤ检测器，温度为２５０ ｃ【＝；柱温４Ｏ 性肿瘤骨转移所引起的疼痛有显著的止痛作用。帕 米膦酸二钠在碳链末端引入氨基，使生物活性大大 增强，其抑制骨吸收作用比依屈膦酸钠强１００倍，比 氯屈膦酸钠强１０倍。帕米膦酸二钠作为骨吸收抑 ℃（保持５ ｍｉｎ），以２０ ｏＣ／ｍｉｎ升温至１８０ ｃｃ（保持 ｌ ｍｉｎ）；载气为氮气；进样量１ Ｉｘｌ。在此色谱条件 下，理论板数以氯苯计算为５ ３５４，气相色谱图见图 １，甲醇、氯苯及溶剂Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺的保留时 问约为０．９７５，５．３０５，７．７７２ ｍｉｎ，分离度均＞４。空 白溶剂Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺对测定不干扰。 制剂，用于治疗肿瘤高血钙和恶性肿瘤骨转移，疗效 显著，副作用低。该药品１９８７年在阿根廷首先上市 后，在英、美以及欧洲国家普遍相继上市使用。由于 该药在合成过程中使用了有机溶剂甲醇、氯苯，本研 究采用气相色谱法，以５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺为 ２．２溶液的制备 ２．２．１对照品溶液的配制精密称取甲醇（１５．６ ｍｇ）、氯苯（１４．５ ｍｇ）分别置２５ ｍｌ量瓶中，加５０％ Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为残留溶 剂对照品储备液，再分别精密量取甲醇对照品贮备 液５．０ ｍｌ和氯苯对照品贮备液０．６ ｍｌ于１０ ｍｌ量 溶剂，对帕米膦酸二钠中甲醇、氯苯溶剂残留量进行 测定，操作简单，重现性好，可用于该原料药中甲醇、 氯苯残留的测定。 １仪器与试药 岛津ＧＣ一１４Ｃ型气相色谱仪；ＦＩＤ检测器。 ・３４・ 酉医 堂学报（Ｊ Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ）２０１０年１月．４１ ｆ１ 塞 ｊ ４ ５ ６ ｔｈｒｉｆｎ ７ ８ ／ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ｔ／ｍｉｎ Ａ．空白溶剂 Ｂ．有机溶剂 １．甲醇；２．氯苯；３．Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺 图１ ２种有机溶剂及空白溶剂气相色谱图 Ｆｉｇ １ Ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｂｌａｎｋ（Ａ）ａｎｄ ｔｗｏ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ（Ｂ） 瓶中，加５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇 醇６２．４，１５６．０，３１２．０，４０５．６，４９９．２ Ｉｘｇ和氯苯１１．６， 匀，作为对照品溶液。． ２．２．２供试品溶液的配制过，取续滤液，即得。 ２．３精密度试验１．５３％和１．０８％。 ２３．２，３４．８，４６．４，５８．０ Ｉｘｇ的标准溶液。照上述色 精密称取供试品１．０ ｇ 谱条件进样１ ｌ，记录色谱图，以峰面积（Ａ）对浓度 （Ｃ）进行线性回归。甲醇Ｙ：３０４．８７Ｘ一７ ９８２．２． ｒ＝０．９９９ ２；氯苯Ｙ＝２ ７２７．６Ｘ一１７ ４６５，ｒ＝０．９９９ ４。 甲醇和氯苯分别在６２．４—４９９．２ ｍｇ／ｍｌ和１１．６— ５８．０ ｍｇ／ｎ￣的浓度范围内线性关系良好。 于具塞试管中，精密加入１０ ｍｌ ５０％ＤＭＦ溶解，滤 取２．２项下对照品溶液，平行进 样５次，测得甲醇、氯苯峰面积的ＲＳＤ分别为 ２．４检测限分别取甲醇、氯苯对照品储备液稀释 ２．６ 回收率试验取本品（批号０４０４０１）６份，每 份约１．０ ｇ，置１０ ｍｌ量瓶中，再精密加入２．２项下 制成一定浓度的溶液，进样１ ｌ，当甲醇、氯苯浓度 对照品溶液适量（低、中、高样品，使甲醇和氯苯浓 度分别约为２４９．６，３１２．０，３７４．４ ｇ／ｍｌ和２７．８４， ３４．８Ｏ，４１．７６ ｇ／ｍ１），加５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺 溶解，并定容至刻度，摇匀。依上述色谱条件，精密 分别为０．３７４ ｇ／ｍｌ，０．２０９ ｇ／ｍｌ，信噪比约为３， 甲醇、氯苯的检测限分别为０．４ ｎｇ，０．２ ｎｇ。 ２．５标准曲线的制备分别精密量取甲醇对照品 储备液１．０，２．５，５．０，６．５，８．０ ｍｌ和氯苯对照品储 备液０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ ｍｌ，分别置１０ ｍｌ量瓶 量取１ 进样，并记录色谱图，计算回收率及ＲＳＤ 值，结果见表１，２。 中，用５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺配制成每毫升含甲 表１ Ｔａｂ １ 甲醇回收率试验结果 Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ 山西医科大学学报（Ｊ Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ）２０１０年１旦！ ！！ 表２ Ｔａｂ ２ ・３５・ 氯苯回收率试验结果 Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ２．７测定结果 取标准对照品溶液与供试三批样 不仅可以使帕米膦酸二钠充分溶解，还可以使氯苯 在Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺充分溶解。 ３．３柱温的选择本实验采用程序升温的方法，测 定时将柱温设定在４Ｏ℃保持５ ｍｉｎ，使甲醇和氯苯 能很好分离，但溶剂Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺沸点高， 故以２０℃／ｍｉｎ升温至１８０ ｏＣ，加快Ｎ，Ｎ一二甲基 甲酰胺出峰。 参考文献： ［１］ 钟永祥，张祥斌帕米膦酸二钠的临床应用进展［Ｊ］．中华全科 医师杂志，２００５，４（１）：２７—２９． 品溶液，进样Ｉ ，进行色谱分析，测定结果见表３。 表３ 帕米膦酸二钠有机溶剂残留量的测定结果 Ｔａｂ ３ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｉｎ ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ￣￣ｏｄｉｕｎｌ ３讨论 ２］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）［Ｍ］．北京：化 学工业出版社，２００５：附录５４—５６． ［３］ 邓婕，李志良，肖玉梅，等．盐酸帕洛诺司琼中有机残留溶剂的 检测［Ｊ］．药物分析杂志，２００７，２７（５）：７３５—７３７． ３．１ 限度的确定 人用药物注册技术要求国际协 调会（ＩＣＨ）的有机溶剂残留量指导原则中，规定甲 醇和氯苯为第二类应该使用的溶剂，本文参照 中国药典２００５年版二部的指标要求，规定待测溶剂 的限度为：甲醇０．３％，氯苯０．０３６％。 ［４］ 朱迎军，李瑞莲，李昌亮．富马酸伊布利特原料中有机残留溶 剂的检测［Ｊ］中南药学，２００８，６（１）：７０—７２． 作者简介：张慧兰，女，１９６３—０３生，本科，工程师，Ｅ—ｍａｉｌ： ｈｕｉｌａｎ１９６３＠１６３．ｃｏｍ． ３．２溶剂的选择 由于帕米膦酸二钠为水溶性药 物，而待测的有机溶剂氯苯在水中的溶解性不好，故 选择５０％Ｎ，Ｎ一二甲基甲酰胺水溶液做溶剂，这样 ［收稿日期：２００９—０８—２０］
