论 著・ 中国医药导报２０１４年１Ｏ月第１１卷第３０期 １７－ＡＡＧ对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞株增殖 和凋亡作用的影响 陈美霓 郭 巍ｚ 赵菊梅 魏晓丽 王爱红 庞秋霞 ７１６０００ １．延安大学医学院实验中心，陕西延安７１６０００；２．延安大学医学院附属医院泌尿外科，陕西延安【摘要】目的观察１７一ＡＡＧ对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝（ＭＴｒ） 比色法检测不同浓度的１７一ＡＡＧ对肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖的影响；荧光显微镜观察碘化丙啶（ＰＩ）染色的细胞凋亡 形态；流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化；免疫组化法检测肝癌ＨｅｐＧ２细胞中重组人血管内皮 生长因子相关蛋白（ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白）表达水平变化。结果不同浓度的１７一ＡＡＧ呈时间、剂量依赖性抑制肝癌 ＨｅｐＧ２细胞的生长增殖（Ｐ＜０．０５）；流式细胞仪分析显示，１７一ＡＡＧ作用ＨｅｐＧ２细胞４８ ｈ后ＧＪＭ期细胞比例上 升。Ｇ ，Ｇｎ期细胞比例下降；０．６３、１．２５、２．５、５．０ Ｉｘｍｏｌ／Ｌ １７一ＡＡＧ作用ＨｅｐＧ２细胞４８ ｈ后的凋亡率分别为（３．２３＋ １．４３）％、（９．７１￣２．２０）％、（１４．１５￣２．３４）％、（２３．６５￣２．５８）％；随着药物浓度的加大，ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白表达逐渐减少。结 论１７一ＡＡＧ对肝癌ＨｅｐＧ２细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，并能抑制ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白的表达。 【关键词】热休克蛋白９０；１７－ＡＡＧ；肝细胞癌；ＭＴＴ法 【中图分类号】Ｒ７３５．７ ｆ文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—７２１０【２０１４）１Ｏ【ｃ）一００１２—０４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ０ｆ １７一ＡＡＧ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＨｅｐＧ２ ＣＨＥＮＭｅｉｎｉｌ ＧＵＯ Ｗｅｉ２ ＺＨＡ０ Ｊｕｒａｅｉｌ ＷＥＩＸｉｏｏｌｉｌ ＷＡＮＧＡｉｈｏｎｇ￣ＰＡＮＧ ＱｉｕｘｉａＩ １．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｙａｎ ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｙａｎ ａｎ ７１６０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ Ａｆｉｌｉｆａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｒａｎ ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｙａｎ ａｎ ７１６０００，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ １７－ａｌｌｙｌａｍｉｎｏ－１７一ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａ－ｎａｍｙｃｉｎ（１７一ＡＡＧ）ｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ— ｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＨｅｐＧ２ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ １７一ＡＡＧ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＭＴＩ＇；ｔｈｅ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｈａｎｇｅｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｓｉｎｇ ＰＩ ｄｙｅｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓ— ｅｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ １７－ＡＡＧ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ—Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ １７－ＡＡＧ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒ－ ａｔｉｏｎ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ （Ｐ＜０．０５）．Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １７－ＡＡＧ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇ ２／Ｍ ｐｈａｓｅ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｔ／Ｇ０ ｐｈａｓｅ ａｔ ４８ ｈ．ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １７－ＡＡＧ ｏｆ ０．６３，１．２５，２．５ ａｎｄ ５．０ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ４８ ｈ，ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ（３．２３＋ １．４３）％，（９．７１＋２．２０）％，（１４．１５￣２－３４）％ａｎｄ（２３．６５＿＋２．５８）％．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ－Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎ— ｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ １７－ＡＡＧ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｃａｎ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ－Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＨＳＰ９０；１７一ＡＡＧ；Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＭＴＦ 原发性肝细胞癌是全球第５位常见恶性肿瘤，其 【基金项目】陕西省教育厅科研计划项目（编号１２ＪＫ０７１３）；陕 西省高水平大学建设专项资金资助项目（编号２０１３ＳＸＴＳ ０２）； 陕西省延安市科学技术研究发展计划项目（编号２０ｌ３一 ＫＷ１５）。 病死率占恶性肿瘤病死率的第３位。据２００８年的报 道，中国肝癌５年患病数为２９．６万例，约占全球肝 癌５年患病数的４８．３％。在未来１０年肝癌的发病数 和病死数均将呈现上升趋势。采用手术切除等治愈方 法仅适合１０％ ２０％的肝癌患者。在５年内复发率仍 分子靶向治疗有着特别重要的意义。ＨＳＰ９０抑制剂 １７一丙烯胺基一ｌ７一去甲氧格尔德霉素（１７一ＡＡＧ）对多 ”。所以寻找以肿瘤细胞特性为作用靶点的 【作者简介】陈美霓（１９７９．６一），女，陕西城固人，硕士，实验 超过７０％ｔ师；研究方向：肿瘤药理。 ‘通讯作者 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ Ｖｏ１．１ １ Ｎｏ．３０ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４ 中国医药导报２０１４年１Ｏ月第１１卷第３Ｏ期 ・论 著・ 种肿瘤细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用。但目前尚 未见１７一ＡＡＧ对肝癌细胞生长及凋亡影响的报道，本 文探讨１７一ＡＡＧ对ＨｅｐＧ２细胞增殖、生长周期、诱导 凋亡及对重组人血管内皮生长因子相关蛋白 （ＶＥＧＦ—Ｃ）的表达进行初步探讨，为１７一ＡＡＧ治疗肝 １００ ｍＬ ＲＮａｓｅ Ａ酶，０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００染色液，微 量振荡器上振荡混匀，４℃避光孵育３０ ｍｉｎ，２００目不 锈钢筛网过滤后流式细胞仪检测。②细胞凋亡：严格 按照ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒说明书步 骤进行。两个实验重复３次。 １．２．５ Ｖ ＥＧＦ—Ｃ蛋白表达的检测将人肝癌ＨｅｐＧ２细 癌的应用提供参考依据。 １材料与方法 ｔ．１材料 胞接种于内有盖玻片的６孔板内培养培养。设对照组 和实验组培养４８ ｈ后。４％多聚甲醛固定２０ ｍｉｎ．ＰＢＳ 洗涤３次，用中性树胶将细胞面朝上固定于载玻片上。 采用免疫组化链霉亲和素一生物素复合物（ＳＡＢＣ）法 染色，胰酶抗原修复，二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色。兔抗 人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２由延安大学医学院实验中 心提供。ＲＰＭＩ一１６４０培养基（赛默飞世尔公司），ｌ７一 ＡＡＧ、四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＩ＂）及碘化丙啶（ＰＩ）（美国 Ｓｉｇｍａ公司）ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒（美 国ＢＤ ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司），ＲＮａｓｅ Ａ酶（德国Ｍｅｒｃｋ公 蛋白、兔二抗及ＤＡＢ显色剂（武汉博士德公司）。 １．２方法 人ＶＥＧＦ—Ｃ稀释比例为１：１００，以ＰＢＳ代替一抗作为 阴性对照。结果判断：细胞胞浆出现棕黄色颗粒判断 对染色细胞着色反应作结果判定。 １．３统计学方法 司），胎牛血清（美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），兔抗人ＶＥＧＦ—Ｃ 为阳性细胞，按照Ｆｒｏｍｏｗｉｔ等综合计分法在高倍镜下 １．２．１细胞培养取液氮保存的人肝癌ＨｅｐＧ２细胞在 ３７ｃＩ＝恒温水浴箱中快速复苏，接种于内含１０％胎牛血 清的ＲＰＭＩ一１６４０培养液中常规培养，选取对数生长 期细胞用于实验研究。 １．２．２ ＨＴＴ法检测细胞增殖能力选取对数生长期的 人肝癌ＨｅｐＧ２细胞用０．２５％胰蛋白酶消化．加完全培 养液制成单细胞悬液，以每孔为３￣１０ 个细胞接种于 采用统计软件ＳＰＳＳ １７．０对实验数据进行分析， 计量资料数据以均数±标准差（ ±ｓ）表示，采用方差分 析，行ｔ检验。计数资料以率表示，采用ｘ。检验。以 Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１ １７－ＡＡＧ对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞生长的抑制作用 Ｍ ｒｒ测定结果显示，分别以０．６３、１．２５、２．５、５．０ ｐ￣ｍｏ］／Ｌ ９６孑Ｌ培养板中，置于３７ｏＣ、５％ＣＯ：的培养箱中培养。培 ４个浓度的１７一ＡＡＧ作用于人肝癌ＨｅｐＧ２细胞２４、 养２４ ｈ后弃上清液．设无细胞孔作为空白组，不加药 ４８、７２ ｈ后。ＨｅｐＧ２细胞均有不同程度的抑制生长作 孑Ｌ为对照组，实验组１７一ＡＡＧ浓度为０．６３、１．２５、２．５、 ５．０ ｔｚｍｏｌ／Ｌ，每组设５个平行孔。分别温育２４、４８、７２ ｈ 后，每孔加入２Ｏ Ｌ浓度为５ ｍｇ／ｍＬ的ＭＴＴ溶液， 培养４ ｈ，吸净上清液，每孑Ｌ加入１５０ Ｌ二甲基亚砜 （ＤＭＳＯ），振荡１０ ｍｉｎ，使用酶标仪测定波长为４９０ ｎｍ 用，各实验组增殖抑制率与对照组比较，差异均有统 计学意义（Ｐ＜０．０５）。其抑制作用经方差分析，具有剂 量和时间依赖关系，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 见表１ 表１不同浓度的１７－ＡＡＧ对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞生长的抑制率（％，Ｙｚｔ：ｓ） 处的吸光度值，空白组调零。细胞增殖抑制率（％）＝（对 照组０Ｄ值一实验组ＯＤ值）／对照组ＯＤ值ｘ１００％。以 上实验结果重复３次。 １．２．３ ＰＩ染色观察细胞核形态人肝癌ＨｅｐＧ２细胞 接种于内有重铬酸钾处理过的盖玻片的２４孑Ｌ板内培 养。在细胞对数生长期时设对照组和实验组培养４８ ｈ 后终止，去上清液，用ＰＢＳ洗涤３次，用５０ Ｉｘｇ／ｍＬ的 ＰＩ荧光染液在４℃冰箱中避光染色２０ ｍｉｎ后．夹出盖 玻片盖在载玻片上，用荧光显微镜观察细胞核形态并 拍照。 １．２．４流式细胞仪分析取对数生长期的人肝癌 ２．２ ＰＩ染色观察凋亡细胞核形态变化 注：与对照组比较， ＜０．０５；１７一ＡＡＧ：１７一丙烯胺基一１７一去甲氧格尔 德霉素 荧光显微镜下观察１７一ＡＡＧ不同浓度组４８ ｈ后 ＰＩ染色下ＨｅｐＧ２细胞的形态变化（图１）。镜下细胞 ＨｅｐＧ２细胞接种于６孔板内培养，设实验组和对照组， 核呈红色荧光，对照组ＨｅｐＧ２细胞形态完整，细胞核 大小一致。着色均匀；实验组可见ＨｅｐＧ２细胞体积变 小，细胞核固缩，呈浓缩强荧光，并随药物浓度升高， 细胞数下降，凋亡小体逐渐增多。 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ Ｖｏ１．１ １ Ｎｏ．３０ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４ 培养４８ ｈ后胰酶消化，用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）离心洗 涤２次。①细胞周期：预冷７０％酒精固定，４℃过夜， 离心，弃去固定液，然后加入ＰＢＳ含５０ ｔ￣ｇ／ｍＬ的ＰＩ， 中国医药导报２０１４年１０月第１１卷第３０期 论 著・ ＨＳＰ９０抑制剂１７一ＡＡＧ对肝癌ＨｅｐＧ２细胞有抑制生 长的作用，抑制作用随着作用时间、药物浓度的增加 而增强。通过ＰＩ荧光染色，观察到１７一ＡＡＧ作用过的 ＨｅｐＧ２细胞数减少，细胞核着色由大小均一变成体积 ［４】Ｈｏｎｇ ＤＳ，Ｂａｎｅ￣ｉ Ｕ，Ｔａｖａｎａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃ一 ｕｌａｒ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ９０（ＨＳＰ９０）：ｌｅｓｓｏｎｓ ｌｅａｒｎｅｄ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｖ，２０１３， ３９：３７５—３８７． 小而深．并出现凋亡小体，提示１７一ＡＡＧ对ＨｅｐＧ２细 胞有抑制增殖并诱导凋亡的作用。本次试验通过细胞 流式检测，提示１７一ＡＡＧ的体外抑制可能与阻滞 ＨｅｐＧ２细胞在Ｇｚ／Ｍ期．并促进凋亡有关。 血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）具有促进恶性肿瘤的 增殖、侵袭和转移的作用。ＶＥＧＦ—Ｃ是ＶＥＧＦ家族中 ［５５］ Ｚｈａｎｇ Ｆ，Ｌａｚｏｒｃｈａｋ ＡＳ，Ｌｉｕ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍＴＯＲＣ２ ａｎｄ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｐａｔｈｗａｙｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ】． Ｂｌｏｏｄ，２０１２，１１９（２５）：６０８０—６０８８． ［６］Ｗａｎｇ ＳＸ，Ｊｕ ＨＱ，Ｌｉｕ ＫＳ，ｅｔ ａ１．ＳＮＸ－２１１２，ａ Ｎｏｖｅｌ Ｈｓｐ９０ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｉｎｄｕｃｅｓ ＧＪＭ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ Ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ＭＣＦ一７ Ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｃｈ，２０１１， ７５（８）：１５４０—１５４５． 最早被发现的促淋巴管生成因子。与其受体ＶＥＧＦＲ一３ ［７］Ｍｉｍｕｒａ Ｎ，Ｆｕｌｃｉｎｉｔｉ Ｍ，Ｇｏｒｇｕｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ＸＢＰ１ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＩＲＥｌｃ￣ｉｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ 结合后促进淋巴管内皮细胞的生长，主要为三条通 路：￣ＶＥＧＦ一３胞内的区酪氨酸Ｙ１２３０／Ｙ１２３１，发生自 磷酸化、被识别、结合，通过诱导活化ＣＲＢ２／ＥＲＸ１／２ ｏｐｔｉｏｎｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２０１２，１１９（２４）：５７７２＿ ５７８１． ８】Ｏ Ｍａｌｌｅｙ ＫＪ，Ｌａｎｇｍａｎｎ Ｇ，Ａｉ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｈｓｐ９０ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １７－ 和ＰＩ１３Ｋ／ＡＫＴ信号通路，启动ＤＮＡ复制，诱导内皮 ［细胞增生：（￣）ＶＥＧＦＲ一３酪氨酸残基Ｙ１０６３发生磷酸 化．诱导活化ＣＲＫ Ｉ／Ⅱ和ｃ＿Ｊｕｎ氨基末端激酶Ｇｎｋｌ／２， ＡＡＧ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬｕＣａＰ３５ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒｓ ｔｏ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２０１２，７２ （１０）：１１１７—１１２３． 引起细胞内信号级联反应的信号；③通过蛋白激酶 Ｃ（ＰＫＣ）依赖的ｐ４２／ｐ４４ ＭＡＰＫ活化途径和ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ 磷酸化产生的信号【 。ＶＥＧＦＲ一３通过与ＶＥＧＦ—Ｃ结 合后，还调节血管渗透性，促进肿瘤组织进人淋巴管， 抑制凋亡，导致肿瘤的高转移率的发生＿１３］。有研究报 道ＨＳＰ９０抑制剂根赤壳菌素类可以抑制ＶＥＧＦ的表 ［９］Ｌｕ Ｘ，Ｘｉａｏ Ｌ，Ｗａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｈｓｐ９０ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ Ｈｓｐ９０ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ田． Ｂｉｏｃｈｅｍ ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１２，８３（８）：９９５－１００４． ［１０】Ｈａｎｓｏｎ ＢＥ，Ｖｅｓｏｌｅ ＤＨ．Ｒｅｔａｓｐｉｍｙｃｉｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＩＰＩ－ ５０４）：ａ ｎｏｖｅｌ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｓ ａｎ ａｎｔｉ－ 达【 ．１７一ＡＡＧ可以通过阻断ＳＴＡＴ３通路抑制胃癌和 乳腺癌细胞ＶＥＧＦ的表达［１５］。本实验研究结果表明， ＶＥＧＦ—Ｃ在人肝癌ＨｅｐＧ２细胞对照组中处于高表 达．一定剂量的１７一ＡＡＧ可以明显下调ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白 ｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇｓ， ２００９，１８（９）：１３７５－１３８３． 【１１］Ｏｓｈｉｋａｗａ Ｇ，Ｎａｇａｏ Ｔ，Ｗｕ Ｎ，ｅｔ ａ１．ｃ－Ｃｂｌ ａｎｄ Ｃｂｌ—ｂ ｌｉｇ－ ａｓｅｓ ｍｅｄｉａｔｅ １７－ａｌｌｙｌａｍｉｎｏｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ－ｉｎ－ ｄｕｃｅｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ Ｆｌｔ３ ｋｉｎａｓｅ 的表达。提示ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白参与了肝癌细胞增殖及 转移的相关生物学行为的，１７一ＡＡＧ可以通过下 调ＶＥＧＦ—Ｃ蛋白的表达抑制淋巴管的生成，可能是 １７一ＡＡＧ抑制肝癌的机制之一。 总之．本次实验证实了ＨＳＰ９０抑制剂ｌ７一ＡＡＧ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔａｎｄｅｍ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｐｒｏｔｅａ－ｓｏｍｅ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ１．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１ １，２８６：３０２６３－ ３０２７３． ［１２】沈飞琼．ＶＥＧＦ—Ｃ及其受体ＶＥＧＦＲ一２／３与肺癌关系的 研究进展［Ｊ］．实用癌症杂志，２０１３，２８（４）：４５２—４５５． 【１３】Ａｃｈｅｎ ＭＧ，Ｍａｎｎ ＧＢ，Ｓｔａｃｋｅｒ ＳＡ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈａｎ・ ｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｏ ｐｒｅｖｅｎｔ ｔｕｍｏｕｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ， ２ｏ０６，９４（１０）：１３５５—１３６０． 能够抑制肝癌ＨｅｐＧ２细胞的增殖。诱导凋亡，并通过 下调ＶＥＧＦ蛋白阻碍肿瘤的侵袭。由于１７一ＡＡＧ发挥 抗肿瘤的机制很多，还需进一步研究，为肝癌临床上 的应用提供实验依据。 【参考文献】 ［１１李倩，杜佳，关鹏，等．中国２００８年肝癌发病、死亡和患 病情况的估计与预测【Ｊ］．中华流行病学杂志，２０１２，３３（６）： ５５４—５５５． ［１４】Ｈｕｒ Ｅ，Ｋｉｍ ＨＨ，Ｃｈｏｉ ＳＭ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ－ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ— ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ——１ａｌｐｈａ／ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｕｃｌｅ－－ ａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｙ ｔｈｅ ９０－ｋＤａ ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｒａｄｉｃｉｃｏｌ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ２００２，６２（５）：９７５—９８２． 【２］Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＥ．Ｈｓｐ９０：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｏｐ Ｃｕｒｒ Ｃｈｅｍ，２０１３，３２８：１５５—２４０． ［１５】肖丽君，赵恩宏，赵爽，等．１７－ＡＡＧ对ＭＣＦ－７细胞增 殖的抑制作用及对ＳＴＡＴ３和ＶＥＧＦ表达的影响［Ｊ］．中 【３】ＺＯＵ Ｂ，ＳＨＩ Ｑ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｏｆ ＨＳＰ９０ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｔｒｅａｔｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｂａｓｉｃ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２０１４，３４：２７０－２７３． 国医科大学学报，２０１３，４２（１）：６５—６８． （收稿Ｅｔ期：２０１４—０６—２５本文编辑：卫轲） ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ Ｖｏ１．１ １ Ｎｏ．３０ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４
