福建农业学报３１（１０）：１０１１～１０１４，２０１６ Ｆｕｊｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｈｔｔｐｔ ．ｆｊｎｙｘｂ．ｃｎ ｄｏｉ：１０．１９３０３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—０３８４．２０１６．１０．００１ 万春和，刘荣昌，程龙飞，等．番鸭中网状内皮组织增生症病毒感染的检测［Ｊ］．福建农业学报，２０１６，３１（１ｏ）：１０１１—１０１４． ＷＡＮ Ｃ－Ｈ，ＬＩＵ Ｒ—Ｃ，ＣＨＥＮＧ Ｌ－Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ｖｉｒａｌ Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｉｎ Ｍｕｓｃｏｖｙ Ｄｕｃｋｓ ＥＪ］．ＦｕｊｉａｎＪｏｕｒｎａｌ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２Ｏ１６，３１（１０）：１０１１—１０１４． 番鸭中网状内皮组织增生症病毒感染的检测 万春和，刘荣昌，程龙飞，傅光华，施少华，陈红梅，傅秋玲，黄 瑜 （福建省农业科学院畜牧兽医研究所／福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心／ 福建省禽病防治重点实验室，福建福州 ３５００１３） 摘 要：网状内皮组织增生症病毒（ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＲＥＶ）是一种可感染多品种禽的免疫抑制病病 原，禽类感染ＲＥＶ后会导致机体发生免疫抑制并由此引发多种病原的继发感染（或混合感染），给养禽业造成 极大损失。本研究利用针对ＲＥＶ基因组长末端重复序列（１ｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）的特异性引物，对２１份 ２０１３年收集的福建（１２份）和浙江（９份）两省的番鸭源病料（肝脏和脾脏组织）进行检测。其中来源于福建 漳州（１株，记为ＲＥＶ－ＦＪ—ＭＤ０１）和浙江宁波（１株，记为ＲＥＶ－ＺＪ—ＭＤ０１）的番鸭源病料检测到ＲＥＶ感染阳 性。将目的片段经克隆后进行序列测定分析发现，ＲＥＶ－ＦＪ—ＭＤ０１和ＲＥＶ－ＺＪ—ＭＤ０１在该扩增区域的核苷酸同源 性为１００ ，与ＧｅｎＢａｎｋ中的ＲＥＶ参考株（除鸽源ＲＥＶ和鸭源７１３株仅１个碱基差异外）核苷酸同源性也为 １００ ；从遗传进化关系可以看出，ＲＥＶ－ＦＪ—ＭＤ０１和ＲＥＶ－ＺＪ—ＭＤ０１与ＲＥＶ参考株遗传进化较近，处于相同的 遗传进化分支。本研究首次证实在福建番鸭中存在ＲＥＶ感染。 关键词：网状内皮组织增生症病毒；番鸭；感染 中图分类号：Ｓ ８５２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０３８４（２０１６）１０—１０１１一Ｏ４ Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ｖｉｒａｌ ＲｅｔｉｃｕｌＯｅｎｄ０ｔｈｅｌｉＯｓｉｓ ｉｎ Ｍｕｓｃｏｖｙ Ｄｕｃｋｓ ＷＡＮ Ｃｈｕｎ－ｈｅ，ＬＩＵ Ｒｏｎｇ—ｃｈａｎｇ，ＣＨＥＮＧ Ｌｏｎｇ—ｆｅｉ，ＦＵ Ｇｕａｎｇ—ｈｕａ，ＳＨＩ Ｓｈａｏ—ｈｕａ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇ—ｍｅｉ， ＦＵ ｑｉｕ－ｌｉｎｇ．ＨＵＡＮＧ Ｙｕ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ Ｆ ｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／ Ｆ ｉａｎ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ／Ｆｕｊ ｉａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３５００１３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ （ＲＥＶ） ａｒｅ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｔｏ ａｖｉａｎ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｅｙ ｃａｎ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｏｒ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｏｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｂｉｒｄｓ．Ａｎ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｎ ｌｅａｄ ｔｏ ｄｉｓａｓｔｒｏｕｓ ｉｍｐａｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｏｕｌｔｒｙ ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ—ｐａｉｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ａｎ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｎ ２ １ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｕｃｋｓ （１２ ｆｒｏｍ Ｆｕｊｉａｎ ａｎｄ ９ ｆｒｏｍ Ｚｈｅｊｉａｎｇ）ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ２０１３．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ，ｏｎｅ ｆｒｏｍ Ｆｕｊｉａｎ（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ ｓｔｒａｉｎ ＲＥＶ－ＦＪ—ＭＤ０１）ａｎｄ ａｎｏｔｈｅｒ ｆｒｏｍ Ｚｈｅｊｉａｎｇ（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ ｓｔｒａｉｎ ＲＥＶ－ＺＪ—ＭＤ０１）ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ． Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ，ｃｌｏｎｅｄ，ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｈａｒｅｄ ａ ｐｅｒｆｅｃｔ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ＯｅｎＢａｎｋ ＲＥＶ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｅｘｃｅｐｔ ｔｈｅ ｐｉｇｅｏｎ－ｏｒｉｇｉｎ ＲＥＶ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｕｃｋ－ｏｒｉｇｉｎ ＲＥＶ ｓｔｒａｉｎ １７３， ｗｈｉｃｈ ｄｉｆｆｅｒｅｄ ｏｎ ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ＲＥＶ ａｐｐｅａｒｅｄ ｃｌｏｓｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ ｗａｓ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ＲＥＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｕｃｋｓ ｉｎ Ｆｕｉｉａｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ；ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｕｃｋ；ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ 收稿日期：２０１６—０８—０３初稿；２０１６～０９—１７修改稿 作者简介：万春和（１９８２一），男，博士，助理研究员，主要从事水禽病毒分子生物学研究（Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｕｎｈｅｗａｎ＠１２６．ｃｏｒｎ） ＊通讯作者：黄瑜（１９６５一），男，博士，研究员，主要从事畜禽传染病防控研究（Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｙｕ一８１５＠１６３．ｃｏｒｎ） 基金项目：国家水禽产业技术体系项目（ＣＡＲＳ－４３）｝福建省畜禽疫病防控技术重大研发平台（２０１４Ｎ２００３）；福建省优良蛋鸭品种与 设施化养殖创新产业化工程项目（２０１４—２０１６）；福建省农业科学院畜牧兽医研究所基金［ＭＹＯ２２０１５（ｓ）一３］ １０１２ 福建农业学报 第３１卷 免疫抑制病是指由不同的病原引起的对家禽免 疫器官造成损伤，使其体液免疫和细胞免疫功能明 显降低，导致禽类对疫苗免疫失败，引起动物机体 易受病原微生物的侵袭而发生激发感染和（或）混 北京全式金生物技术有限公司；Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ纯 化回收试剂盒（货号ＤＰ２１４）和快速质粒小提试剂 盒（货号ＤＰ１０５）购白天根生化科技（北京）有限 公司；２×ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ＭＩＸ（货号Ｋ１０８１）购自赛 默飞世尔科技（中国）有限公司；ＤＬ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ（货号３４２７Ｑ）、ｐＭＤ １８－Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（货号６０１１）购自宝生物工程（大连）有限公 合感染，造成禽类生长性能下降 ］。特别是部分 免疫抑制病原如禽白血病病毒（ａｖｉａｎ ｌｅｕｃｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＡＬＶ）和网状内皮组织增生症病毒 （ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＲＥＶ）还可污染禽胚 司。其他化学试剂盒药品购自国药集团化学试剂有 源疫苗，导致因疫苗免疫接种造成的疫病传播，给 养禽业造成极大损失＿３］。 ＲＥＶ病毒颗粒呈球形，直径约为１００ ｎｍ，为 单股正链、有囊膜的ＲＮＡ病毒。ＲＥＶ以双倍体 病毒的形式（２条相同的ＲＮＡ分子）在病毒基因 组５ 端以非共价键连接。ＲＥＶ病毒基因组一般为 ８ ２００ ｂｐ左右，主要有病毒两端的长末端重复序列 （１ｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎｓ，ＬＴＲｓ）和衣壳蛋白基因 （ｇａｇ）、聚合酶基因（ｐｏ１）和囊膜蛋白基因（ｅｎｖ） 组成 一引。 ＲＥＶ最早（１９５８年）分离自患有内脏淋巴瘤 的火鸡［６］，我国于１９８８年首次见有ＲＥＶ感染的报 道＿７］。ＲＥＶ感染的宿主谱较广，可感染大部分禽 类，如火鸡、鸡、鸭（包括野鸭）、鹅、鹌鹑、孔 雀、鹧鸪和野鸟等 ］。国外关于ＲＥＶ可感染鸭群 的相关研究报道较早（如鸭脾坏死病毒ＳＮＶ株和 鸭传染性贫血病毒ＤＩＡＶ株），但我国直到２００８年 才从山东鸭场中检测到ＲＥＶ感染阳性 ］，随后 ２０１１年从浙江番鸭中检测到ＲＥＶ感染阳性ｌ＿】 ， 证实番鸭可感染ＲＥＶ。番鸭作为福建地区的特色 水禽养殖品种，目前尚未见在该地区水禽是否存在 ＲＥＶ感染的相关研究报道。本研究利用针对ＬＴＲ 区的特异性检浈０引物，对来自闽浙两地２０１３年收 集的２１份病料进行ＲＥＶ感染的流行病学调查， 结果发现两地番鸭群中均存在ＲＥＶ感染，尤其是 在福建番鸭中首次证实存在ＲＥＶ感染。 １材料与方法 １．１病料处理 ２１份番鸭源病料均收集自２０１３年，其中福建 番鸭源病料１２份，浙江番鸭源病料９份。按照常 规方法取死亡番鸭的肝脏和脾脏，按照１：５比例 加灭菌ＰＢＳ研磨处理后，反复冻融３次后４ ０００ ｒ・ｍｉｎ 离心１５ ｍｉｎ，小心吸取上清备用。 １．２试剂、载体和菌株 ＥａｓｙＰｕｒｅ Ｖｉｒａｌ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｋｉｔ（货号ＥＲ２０ １— ０１）、感受态细胞Ｔｒａｎｓ５ａ（货号ＣＤ２０１—０１）购自 限公司。 １．３试验引物 本研究使用的引物见表１，因ＲＥＶ的ＬＴＲ区 可整合到马立克病毒（Ｍａｒｅｋ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ， ＭＤＶ）和禽痘病毒（Ｆｏｗｌｐｏｘ Ｖｉｒｕｓ，ＦＰＶ）上， 同时也为了研究番鸭中是否存在ＭＤＶ和ＦＰＶ感 染，本研究也参考相关文献（表１）合成检测 ＭＤＶ和ＦＰＶ的引物，所有引物均由上海博尚生 物技术有限公司合成。 表１本研究使用的引物 Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ １．４ ＲＥＶ的ＰＣＲ检测 参考ＥａｓｙＰｕｒｅ Ｖｉｒａｌ ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｋｉｔ试剂盒方 法提取病毒的核酸为模板，使用２×ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ＭＩＸ进行ＰＣＲ扩增，扩增的反应体系是５Ｏ Ｌ， 其中２×ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ反应液２５肛Ｌ、上下游引 物（ＲＥＶ、ＭＤＶ和ＦＰＶ分别加入各自的ＰＣＲ反 应管中，引物浓度为２０ ｒｎｍｏｌ・Ｌ ）各１ Ｌ、提 取的模板１ Ｌ，补充灭菌去离子水至终体积５０ Ｌ。反应条件为：９４℃预变性５ ｍｉｎ后进入循环， ９４℃变性５０ Ｓ，５４。Ｃ退火３０ Ｓ，７２℃延伸４５ Ｓ，３５ 个循环结束后，７２℃终延伸１０ ｍｉｎ。将符合预期 的目的条带经Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＮＡ胶回收试剂盒切胶 回收纯化后克隆到ｐＭＤ １８一Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ Ｃ［ｏｎｉｒＬｇ Ｋｉｔ， 筛选出相应的阳性重组质粒并送由生工生物工程 （上海）股份有限公司进行序列测定。 第１Ｏ期 １．５序列分析 万春和等：番鸭中网状内皮组织增生症病毒感染的检测 ２．２ 序列分析 １Ｏ１３ 将获得序列经ＮＣＢＩ数据库进行ＢＬＡＳＴ分 析，将符合试验预期的序列利用ＤＮＡＳｔａｒ软件进 行序列拼接，并和ＧｅｎＢａｎｋ中登录的ＲＥＶ相关分 离株进行核苷酸序列同源性比较和遗传进化分析。 将克隆获得的序列经ＢＬＡＳＴ分析验证符合试 验预期后进行拼接，获得ＲＥＶ—ＦＪ—ＭＤ０１株和 ＲＥＶ—ＺＪ—ＭＤ０１株目的片段大小均为３８３ ｂｐ，相互 之间的核苷酸同源性为１００ ９／６。所测的序列结果 为： ＧＣＣ ＴＴＡ ＧＣＣ ＧＣＣ ＡＴＴ ＧＴＡ ＣＴＴ ＧＡＴ ＡＴＡ ＴＴＴ 本研究使用的ＲＥＶ分离株相关信息见表２。 表２参考株信息 Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ＣＧＣ Ｔ（ Ａ ＴＡＴ ＣＡＴ ＴＴＣ ＴＣＧ ＧＡＡ ＴＣＧ ＧＣＡ ＴＣＡ ＡＧＡ ＧＣＡ ＧＧＣ ＴＣＡ ＴＡＡ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＡＡ ＧＧＡ ＡＡＴ ＧＴＴ Ｔ（ Ｔ ＴＧＡ ＡＧＧ ＣＡＡ ＧＣＡ ＴＣＡ ＧＡＣ ＣＡＣ ＴＴＧ ＣＡＣ ＣＡＴ ＣＣＡ ＡＴＣ ＡＣＧ ＡＡＣ ＡＡＡ ＣＡＣ ＧＡＧ ＡＴＣ （ ＡＡ ＣＴＡ ＴＣＡ ＴＡＣ ＴＧＡ ＧＣＣ ＡＡＴ ＧＧＴ ＴＧＴ ＡＡＡ （ ＧＧ ＣＡＧ ＡＴＧ ＣＴＡ ＴＣＣ ＴＣＣ ＡＡＴ ＧＡＧ ＧＧＡ ＡＡＡ ＴＧＴ ＣＡＴ ＧＣＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＧＴ ＡＡＧ ＣＧＧ ＣＴＡ ＴＡＴ ＡＡ（ ＣＣＡ ＧＧＴ ＧＣＡ ＴＣＴ ＣＴＴ ＧＣＴ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＧＣ ＣＧＴ ＣＣＴ ＡＣＡ ＣＡＴ Ｔ（ Ｔ ＴＧＴ ＧＡＣ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＧＡＡ ＴＣＴ ＧＴＡ ＡＴＡ ＡＡＡ ＧＣＴ ＴＴＴ ＴＣＴ ＴＣＴ ＡＴＡ ＴＣＣ ＴＣＡ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＡＧ ＴＧＡ ＧＡＧ ＧＡＧ ＡＴＴ ＴＴＧ ＴＴＣ ＧＴＧ ＧＴＧ ＴＴＧ ＧＣＴ ＧＧ 测定的ＲＥＶ—ＦＪ—ＭＤＯ１株和ＲＥＶ—ＺＪ—ＭＤＯ１株 注：表示ＭＤＶ整合有ＲＥＶ的ＬＴＲ区序列。 目的片段和鸽源ＲＥＶ分离株（ＧＤＢＬ１４０１株和 ＧＤＢＩ １４０２株）仅存在１个碱基差异（２６位Ｔ／ Ｃ），和鸭源ＲＥＶ分离株（７１３株）仅存在１个碱 基差异（３０１位Ａ／Ｃ），核苷酸同源性均为 ９９．７ 。和表２中的其他ＲＥＶ分离株的核苷酸同 源性均为１００．０ 。 ２．３遗传进化分析 ２结果与分析 ２．１ ＰＣＲ扩增 ２１份番鸭源病料进行ＲＥＶ检测引物进行检 测，见有２份番鸭病料检测到阳性目的片段（３８３ ｂｐ）扩增，阳性率为９．５２５ （２／２１）。其中福建 地区ｌ２份病料检测到１份（记为ＲＥＶ＿ＦＪ—ＭＤ０１） 利用ＭＥＧＡ６．０５绘制相互之间的遗传进化 树，采用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ—Ｊｏｉｎｉｎｇ法，用Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ对进 化树的可靠性进行评价，重复１ ０００次，可见 阳性，阳性率为８．３３ （１／１２）；浙江９份病料检 ｉ贝４到１份（记为ＲＥＶ～ＺＪ—ＭＤ０１）阳性，阳性率为 ｌ１．１１％（１／９）。所有病料均未检测到ＭＤＶ和 ＦＰＶ感染阳性（图１）。 ＲＥＶ—ＦＪ—ＭＤ０１株和ＲＥＶ—ＺＪ—ＭＤ０１株在遗传进化 上属于典型的ＲＥＶ遗传进化分支（图２）。 Ｋ ０４７∞ｐ驴∞ ＫＵ２０４７￣ 驴ｏｌｌ ◆ＦＥＶ－ＺＪ－ＭＤ０１ Ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｋｅ，ｋ ◆ｆ ＦＪ－￣ＩＸＨ Ｍ￣ＳＣＣＷ山ｃｋ Ｋｆ８３３８５２ ｒ＾棚５ ２０００ｂｐ １０００ ｂｐ ７５０ ｂｐ ５００ ｂｐ Ｊ口，Ｏｌ ５Ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｕｃｋ ＦＪ４３９１２０ｃｈＣｋｅｎ ＦＪ４３９１１９ｇＯ∞ｅ ＧＧ４１５６４６ ｃｈｉｃｋｅｎ ＫＪ７５６３４９ｔｕ￣ｅｙ 船３山ｃＩｔ ２５０ ｂｐ 图２ ＬＴＲ序列遗传进化分析 １００ｂｐ Ｆｉｇ．２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＬＴＲ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ 图ｌ 临床样品的ＰＣＲ扩增 Ｆｉｇ．１ ＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃ ｓａｍｐｌｅｓ ３ 讨 论 研究发现，ＲＥＶ仅有一个血清型，但可通过 注：１～３为ＲＥＶ ＦＪ—ＭＤ０１病料ＭＤＶ、ＦＰＶ和ＲＥＶ测；４～ ６为ＲＥｖ—ｚｒＪ—ＭＩ）Ｏ１病料ＭＤＶ、ＦＰＶ和ＲＥＶ检测；７为阴性对 照；Ｍ为ＤＩ ２ ０００ Ｍａｒｋｅｒ。 １Ｏ１４ 福建农业学报 第３１卷 针对ＲＥＶ的特异性单抗将其进一步细分为３个亚 型（Ｉ型、Ⅱ型和Ⅲ型），且近年来流行的主要是 Ⅲ型ＲＥＶ＿１ ＂］。对ＲＥＶ的ＬＴＲ区的检测引物扩 增片段核苷酸序列进行分析比对发现，不同宿主、 不同地区与不同来源的ＲＥＶ在该扩增区域十分保 守，仅存在个别碱基差异，表明该检测引物可有效 用于ＲＥＶ的流行病学调查。 ＲＥＶ虽然是ＲＮＡ病毒，但和其他逆转录病 毒（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）一样，病毒在侵入宿主细胞后， 其正链单股ＲＮＡ可在病毒自身逆转录酶（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅ）作用下反转录，并可在病毒整合酶 （ｉｎｔｅｇｒａｓｅ）基因作用下整合进宿主细胞染色体基 因中，如马立克病毒口胡和痘病毒 叼均见有整合 ＲＥＶ的相关报道。研究还发现，整合ＲＥＶ的病毒 存在进化加快的趋势，且可导致病毒毒力增强【２ 。 当前，水禽源免疫抑制病病原相关研究不多， 黄瑜等 结合其团队多年来对水禽主要疫病流行 病学调查研究认为鸭群的免疫抑制病严重制约我国 水禽业健康养殖水平。本研究首次在我国番鸭主产 地——福建地区鸭群中证实存在ＲＥＶ感染，提示 我们需对该地区水禽ＲＥＶ的感染情况进行进一步 的流行病学调查，并应储备性开展水禽源ＲＥＶ疫 苗研究工作。 参考文献： ［１］高玉龙，秦立廷，王笑梅．家禽病毒性免疫抑制病流行特点与 防控对策［Ｊ］．中国家禽，２０１２，３４（１５）：５一ｌ１． ［２］张颖，有祥，宋晓娜，等．商品肉鸭免疫抑制病病原体共感 染情况调查［Ｊ］．中国兽医学报，２０１３，３３（６）：８２８—８３２． ［３］陈翠腾，傅光华，黄瑜．家禽病毒性免疫抑制病研究进展 ［Ｊ］．畜牧与兽医，２０１４，４６（７）：１２６—１２９． ｒ４］ＬＩＮ Ｃ，ＣＨＥＮ Ｃ，ＷＡＮＧ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ａｖｉａｎ ｒｅｔｉｃｕ１ｏｅｎｄｏｔｈｅ１ｉ０ｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｇｅｅｓｅ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，１３６（３～ ４）：２４６～２４９． ［５］邓小芸，祁小乐，高玉龙，等．禽网状内皮组织增生症流行现 状及检测技术研究进展［Ｊ］．动物医学进展，２０１０，３１（１０）： ９３—９６． ｒ６］ＰＵＲＣＨＡＳＥ Ｈ Ｇ，ＷＩＴＴＥＲ Ｒ Ｌ．Ｔｈｅ ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄ０ｔｈｅｌｉ０ｓｉｓ ｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９７５，７１： １０３—１２４． ［７］何宏虎，陈溥言，蔡宝祥．禽网状内皮组织增殖病病毒的分离 鉴定［Ｊ］．中国畜禽传染病，１９８８，（２）：１—２． ［８］姜莉莉．东北地区野生鸟类主要禽免疫抑制病病原感染情况调 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ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｐｉｇｅｏｎｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ１．Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ，２０１６，１６１（７）：２００７—２０１１． ［１６３ ＭＯＴＨＡ ＭＸ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ，ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｎ—ＯＶＯ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｃｕ１ｏｅｎｄｏｔｈｅ１ｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ［ｊ］．Ｖｅｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９８７，１４（４）： ４１１—４１７． ［１７］ＪＩＡＮＧ Ｌ，ＤＥＮＧ Ｘ，ＧＡＯ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｒｓｔ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄ０ｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｍａｌｌａｒｄｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］． Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ，２０１４，１５９（８）：２０５１—２０５７． ［１８１ ＬＩ Ｊ，ＤＯＮＧ ｘ，ＹＡＮＧ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｗｈｏｌｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｒｅｔｉｃｕ１０ｅｎｄｏｔｈｅｌｊｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ＭａｒｅｔＣｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｐｏｕｈ Ｓｅｉ，２０１５，９４（４）； ６４３—６４９． ［１９１ ＫＯ０ Ｂ Ｓ，ＬＥＥ Ｈ Ｒ，ＪＥＯＮ Ｅ ０，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ ｉｎ ａ ｌａｙｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎ ｆｌｏｃｋ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｏｗｌｐｏｘ ｖｉｒｕｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ Ｅ１］．Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ，２０１３。５７（４）：８１２—８１７． ［２０］崔治中．禽反转录病毒与ＤＮＡ病毒间的基因重组及其流行 病学意义［Ｊ］．病毒学报，２００６，２２（２）：１５Ｏ一１５４． ［２１］黄瑜，祁保民，彭春香，等．鸭的免疫抑制病［Ｊ］．中国兽 医杂志，２０１０，４６（７）：４８—５Ｏ． （责任编辑：柯文辉）
