２０１０年７月第７卷第２１期 ・药品鉴定・ Ｈ ＰＬＣ法测定注射用替卡西林钠克拉维酸钾的 有关物质 陈颖 ，傅嘉华 ，周丽梅 （１．广东食品药品职业学院，广东广州 ５１０５２０；２．广州白云山天心药业股份有限公司，广东广州５１００００） ［摘要】目的：建立ＨＰＬＣ法测定注射用替卡西林钠克拉维酸钾有关物质的方法。方法：采用氰基硅烷键合硅胶（４．６ ｍｉｎｘ ２５０ ｍｍ，５岬）色谱柱；流动相：０．１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠溶液（ｐＨ＝３．２５）一异丙醇（９７．５：２．５）；检测波长：２３０ ａｍ；流速： １．０ ｍｌ／ｍｉｎ。结果：各杂质峰与主峰分离度良好，克拉维酸的最小检测限为０．１９３￣ｇ／ｍｌ，替卡西林的最小检测限为 ０．３５５￣ｇ／ｍｌ。结论：本方法可用于注射用替卡西林钠克拉维酸钾的有关物质检测，且方法简便快速、准确可靠。 【关键词】替卡西林钠；克拉维酸钾；有关物质 【中图分类号】Ｒ９２７．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—７２１０（２０１０）０７（ｃ）一０４９—０２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｎ Ｔｉｃａｒｅｉｌｌｉｎ ｄｉｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ ＣＨＥＮ Ｙｉｎ￣，ＦＵ 瑚 ＺＨＯＵ Ｌｉｍｅｉ２ （１．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １０５２０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｂａｉｙｕｎｓｈａｎ Ｔｉａｎｘｉｎ Ｐｈａｒｍａ・ ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １００００，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｌ￣ｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ ｄｉｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｌａｖｕｌｎａａｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃ— ｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ Ｍａｃｈｅｒｅｙ－ｎａｇｅｌ（４．６ ｍｍｘ２５０ ｍＩｎ，５ ｎ１）ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ０．１ｍｏｌ／Ｌ－ｓｏｄｉｕｍ ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐＨ＝３．２５）ａｎｄ ｐｒｏｐａｎｏｌ（７５：２５），ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２３０ ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｗｅｌｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ Ｗａｓ ０．１９３ ｔ￣ｓ／ｍｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ ｄｉｓｄｏｉｕｍ ｗａｓ ０．３５５ 咖１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｕｉｔｂａｌｅ ｏｆｒ ｈｔｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ ｄｉｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ Ｐｏｔｓａｓｉｕｍ Ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ ｏｆｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ ｄｉｓｏｄｉｕｍ；Ｐｏｔｓａｓｉｕｍ Ｃｌａｖｕｌｎａａｔｅ；Ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ 注射用替卡西林钠克拉维酸钾是一种由Ｂ一内酰胺类抗 ＨＷ－２０００型色谱工作站（南京千谱公司）；ＡＢ２０４一Ｓ ＡＧ１３５电 生素与Ｂ一内酰胺酶抑制剂组成的复方制剂。临床中多种革 子天平（瑞士ＭＥｒＩＴ】ｒＬＥＲ公司）。 兰阳性菌和阴性菌都能产生Ｂ一内酰胺酶，这类酶能在青霉 １．２试药 素类药物作用于病原体之前将其破坏，从而降低治疗效果。 替卡西林钠对照品；克拉维酸对照品（批号：０４２９— 因此药理专家研究出了耐Ｂ一内酰胺酶类青霉素来克服这一 ２００２０３，含量：９５．０％，中国药品生物制品检定所）；杂质Ａ；注 临床现象口１．其中替卡西林钠克拉维酸钾四是较为优秀的一 射用替卡西林钠克拉维酸钾（１５：１）（规格：３．２ ｇ，瓶，批号： 种。早在１９９７年Ｒｅａｄｉｎｇ等报道，克拉维酸可对Ｂ一内酰胺酶 Ｚ２００４０００１、Ｚ２００４０００２、Ｚ２００４０００３，广州白云山天心药业股 产生一种不可逆的抑制作用，其特性增强了替卡西林的效 份有限公司）；异丙醇（美国ＴＥＤＩＡ公司，色谱纯）；其他试剂 果。近年来，也有文献报道注射用替卡西林钠克拉维酸钾对 均为分析纯。 治疗老年社区获得性肺炎（ＣＡＰ）［３－４］有明显的疗效，而且非发 ２方法与结果 酵菌（ＮＦＧＮＢ）对其耐药性也低圄。由于克拉维酸盐对多种Ｂ一 ２．１色谱条件 内酰胺酶均是一种强有力的抑制剂，因此与替卡西林的复合 色谱柱：氰基硅烷键合硅胶（４．６ ｍｍｘ２５０ ｒａｉｎ，５ ｍ）；流 剂型成为抗菌活性更强，抗菌谱更广的抗生素。建立该复方 动相：０．１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠溶液（ｐＨ＝３．２５）一异丙醇（９７．５：２．５）； 注射剂有关物质的检验方法。对于更好地控制其质量有重要 检测波长：２３０ Ｂｉｎ；流速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；进样量：２０ ｌ。 的意义。 ２．２溶液制备 １仪器与试药 ２．２．１对照品溶液的制备取克拉维酸对照品适量，精密称 １．１仪器 定，用流动相制备成１ ｍｇ／ｍｌ的溶液，置沸水浴中加热１０ ｍｉｎ， 高效液相色谱仪Ｓｐｅｃｔｒａ ｓｙｓｔｅｍ ＳＣＭ １０００．Ｐ ４０００四元 冷却，即得对照品溶液。 低压泵，检测器Ｓｐｅｃｔｒａ ｓｙｓｔｅｍ ＵＶ １０００（美国光谱物理）； ２．２．２供试品溶液的制备精密称取本品约５Ｏ ｍｇ，置５Ｏ ｍｌ 【作者简介】陈颖（１９８０－），女，助理工程师。 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ巾曩医药弓报４９ ・药品鉴定・ 西林的最小检测限为０．３５５ ｗｇ／ｍｌ。 ２０１０年７月第７卷第２１期 ２．３系统适用性试验 分别取空白溶剂、克拉维酸对照品溶液和供试品溶液． 分别注入液相色谱仪，记录供试品色谱图至替卡西林峰保留时 间的２倍。供试品溶液色谱图如显杂峰，除溶剂峰外，以杂质 Ａ的峰面积和其余杂峰总面积对对照溶液两主峰面积，计算 有关物质的含量。ＨＰＬＣ色谱图见图１。替卡西林和克拉维酸 ２．６样品测定及与英国药典版标准比较 取样品，按照“２．１”项下色谱条件进行检测，同时与英国 药典方法进行比较。结果见表ｌ。 表１ 样品含量测定结果（％。ｎ＝３） Ｔａｂ．１ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆｓａｍｐｌｅｓ（％， ＝３） 两峰之间的分离度不小于４，且两峰的拖尾因子均应小于 １．５，理论板数按替卡西林计算应大于３ ０００。 蘸 Ａ 嚣 簧 蕃嚣 曼 八 Ｂ 醛 瞄 嚣 ： ． 。。 。。天 ｉ ｉ ± ｉ ｉ ｊ ｉ ： ， Ｃ 图１ ＨＰＬＣ色谱图 （Ａ．空白；Ｂ．对照品；Ｃ．供试品） Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （Ａ．Ｂｌａｎｃｋ；Ｂ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ；Ｃ．Ｓａｍｐｌｅ） ２．４专属性试验 将样品经强光ＬＸ４ ５００、加热、酸、碱、氧化等条件破坏 后，按照“２．１”项下色谱条件进行检测，与未经破坏的样品进 行比较。结果显示，经过破坏的样品杂质峰均有所增加，与主 峰分离度达到《中国药典》要求。 ２．５检测限网 取供试品溶液．以逐步稀释法，稀释至检测峰为基线噪 音的３倍，得出克拉维酸的最小检测限为０．１９３ Ｉ￣ｇ／ｍｌ，替卡 ５０巾国医药导掘ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ 经实验证明，本法与英国药典标准 对注射用替卡西林 钠克拉维酸钾有关物质测定结果相近．且比起英国药典的梯 度洗脱方法更加快速、简便，能准确地控制产品质量。 ３讨论 本文是参照进口注册标准注射用替卡维酸钾含量测定 项下方法，和英国药典替卡西林钠标准有关物质项下方法的 要求，建立注射用替卡西林钠克拉维酸钾有关物质测定方 法。从专属性试验可知，产品经强光、加热、酸、碱、氧化等条 件破坏后杂质Ａ均有所增加。杂质Ａ是由替卡西林降解产 生，为脱羧基替卡西林，英国药典标准以杂质Ａ作为对照品， 对杂质Ａ以及其他杂质含量进行外标法检测。在国内杂质Ａ 无法获得，经试验证明在该色谱条件下，杂质Ａ对替卡西林 相对保留时间为１．７，可作为杂质Ａ的定位：杂质Ａ对替卡 西林的相对响应因子为ｌ 捌，故采用主成分自身对照法测定 本品有关物质含量。 【参考文献】 ［１】Ｓｏｎｇ ＫＨ，Ｊｅｏｎ ＪＨ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＯＬＩｔｅＯＤ＇ｌｅｓ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｂａｃｔｅｒｉｌａ ｐｅｒｉｔｏｎ ｉｔｉｓ ｄｕｅ ｔｏ ｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａ ｅｏｌｉ ａｎｄ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ：Ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｍａｔｃｈｅｄ ｃａｓｅ－－ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ【ＪＪ． ＢＭＣ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００９，（９）：４１－－－４５． ［２Ｊ Ｌａｒｏｃｈｅ Ｅ，Ｐａｗｌａｋ Ｂ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｎａｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ａｎｄ ｃｌａｓｓ １，２ ｎａｄ ３ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｉｎ Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａ ｅｏｌｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｄｅｎｓｅｌｙ ｐｏｐｕｌａｔｅｄ ｅｓｔｕａｒｙ（Ｓｅｉｎｅ，Ｆｒｎａｃｅ）［Ｊ］．ＦＥＭＳＭ ｉｅｒｏｂｉｏｌ Ｅｃｏｌ，２００９，（６８）：１１８－１３０． ［３】郁和平．阿莫西林／克拉维酸和替卡西林／克拉维酸对人类粒性细胞活 性的影响［Ｊ］．国外医药：抗生素分册，１９９８，１９（２）：９６． 【４】曹春强，郭鹏，张晓菊．替卡西林钠克拉维酸钾序贯疗法治疗老年社区 获得性肺炎疗效观察田．Ｉ临床合理用药，２００９，２（１ １）：５３—５４． 【５】姜维苓．非发酵菌感染及其抗菌药物治疗『ＪＪ．中国药事，２００９，２３（７）： ７１０－７１２． ｆ６１国家药典委员会．中华人民共和国药典 １．二部．北京：化学工业出版 社，２００５：附录１７３，１８３． 】周岐勋，李健和，徐幸民．高效液相色谱法测定盐酸甲氯芬酯分散片含 量及有关物质叽中国当代医药，２００９，１６（４）：７３—７６． 【８】关强，王云龙，杜遵义．高效液相色谱法测定延胡索药材中延胡索乙素 的含量ＩＪＪ冲国当代医药，２００９，１６（４）：７８—７９． ［９］刘慧明．高效液相色谱技术及其在药物分析中的应用【Ｊ】．中国现代医 生，２００７，４５（２０）：１１０． 【１Ｏ】王娟．ＨＰＬＣ法测定匹卡米隆分散片的有关物质［Ｊ】．中国现代医生， ２００７，４５（８）：６８，７７． （收稿日期：２０：０—０３—２６）
