试验研究 应用酶联免疫吸附试验快速诊断猪囊虫 旋毛虫的研究 乔墨 （宁夏石嘴山市动物卫生监督所，石嘴山７５３０００） 摘要：猪囊虫、旋毛虫病严重威胁着人体健康，传统的检验方法是屠宰后剖检、压片镜检，检出病猪销毁处理，造成 了很大积极损失。应用酶联免疫吸附试验活体检验猪囊虫、旋毛虫病，对病猪进行有效治疗，减少经济损失。 关键词：生猪；猪囊虫；旋毛虫；酶联免疫吸附试验 猪囊虫、旋毛虫病是一种人畜共患的寄生虫病，从发现 该试验操作简便、敏感性高，是目前国内较先进的检验方法， 至今已有１６０多年历史，开展检验至今已１３０多年，但至今 属农业部推广的检测方法。 不但未得到控制，而且发病范围在逐渐扩大，成为全球性疾 ３试验数量 病，给畜牧业及食品工业带来了很大的经济损失，严重危害 根据《动物疫病检测方法》检测范围，对猪囊虫散发区２％ 着人体健康。 屠宰猪进行病原学调查，检测猪囊虫生猪５６０头份，旋毛虫 猪由于吞食生活泔水、吃死老鼠、吃人的粪便、吃某些昆 ５６０头份，共计１１２０头份。 虫等引起感染囊虫、旋毛虫病。猪患囊虫病时表现为营养不 ４试验器械、试剂准备 良，生长发育受阻，贫血，水肿等，如囊尾蚴侵害肺及喉时则 ４．１ 器械 聚苯乙烯板（２０孔或４０孔）定量加样器 出现呼吸困难，声音嘶哑，吞咽困难，寄生在眼内可使视觉障 （０．１ｍＬ）及其吸嘴、酶标检测仪、普通滤纸条、微量注射器、电 碍甚至失明；寄生在大脑时，出现癫痫，急性脑炎，甚至突然 冰箱 死亡，影响了养猪业生产的健康发展。 ４．２试剂抗原，阴、阳性血清，酶标抗体（均有兰州兽医研 近年来我国也经常发生人感染旋毛虫病。人感染主要是 究所提供）。 摄食了生的或未熟透的含有虫体包囊的猪肉，或是食入被幼 包被液：碳酸钠缓冲液ｐＨ９．５—９．６ 虫污染的食品，可引起多种病症，严重的导致死亡，对人体健 稀释液：磷酸盐缓冲液ｐＨ７．４ 康带来了威胁。如１９８６年ｌ２月河南平顶山发生人体旋毛虫 底物液：磷酸柠檬酸缓冲液ｐＨ５．０ 病流行，仅１９８７年３月就发病１０３例。１９９５年１月６日广 终止液：２ＭＨ２ＳＯ 液 西德保县一村庄发生一起旋毛虫病流行，发病５３人，死亡４ ５试验方法、步骤 人，给人体健康造成危害。因此猪囊虫、旋毛虫的检验被列入 ５．１采血对待宰生猪进行编号，静脉采血２ｍＬ，静止，血 肉品卫生检验的重要检验项目之一。 凝后取出血清，待检。血清样与生猪编号一致。 猪囊虫主要寄生部位为咬肌、腰肌、肩胛外侧肌等。旋毛 ５．２包被取４Ｏ孑Ｌ聚苯乙烯反应板，每次每孑Ｌ注０．１ｍＬ 虫主要寄生部位为膈肌。传统检验方法是宰后剖检猪胴体的 包被液，静置２ｍｉｎ，重复３次，甩干后加诊断抗原０．１ｍＬ，５０％ 咬肌、腰肌、肩胛外侧肌检验猪囊虫；采膈肌角压片镜检旋毛 恒温水浴１ｈ，置４℃冰箱过夜。 虫，对检出病猪胴体进行无害化处理（高温炼油），造成了很 ５．３加被检血样每孑Ｌ加０．１ｍＬ被检血样，每头份只加１ 大的经济损失，同时检验费时费事，准确率低，容易造成误 孔，按照血清样本编号依次加入，每块反应板留下１孔加阳 检、漏检。我们与兰州兽医研究所寄生虫病防治专家联系提 性对照血清，１孑Ｌ加阴性对照血清，１孑Ｌ空白，室温下放置４～ 出采用酶联免疫吸附试验活体检验猪囊虫、旋毛虫。 ８ｒａｉｎｏ １试验方法 ５．４加酶标抗体，弃去被样血样及阳性和阴性对照血样， 宰前采用酶联免疫吸附试验，宰后采用剖检、压片镜检。 加稀释液洗涤３次，甩干后加酶标抗体，每孔０．１ｍＬ，室温 ２酶联免疫吸附试验原理 置４ｍｉｎ。 酶联吸附试验是根据被本病感染的血清中的抗体能特 ５．５加终止液，底物显色时，每孔加１滴终止液。 异性地吸附到经抗原致敏的聚苯乙烯板上，再与酶标抗体结 ６结果判定 合，加入底物后，呈现颜色反应，根据颜色的深浅作出判定。 ６．１眼观判定有色，阳性；无色，阴性。 ・・目圜翟蓄暇嫡 Ｏｏ ２００９年第４期 试验研究 鸡传染牲支笺管炎病毒 地方流行株的分离鉴定及免疫试验 吉文汇，闫 芳 ，李绪英，赵宇军，刘 娟，刘风波，吴倩，任家琰，化丽珍 （山西农业大学动物科技学院，太谷０３０８０１） 摘要：从山西疑似ＩＢ的病料中，分离到１株ＩＢＶ分离株，该分离株在电镜下可见到直径为６０—１２０ｎｍ，有囊膜及纤 突呈冠状排列的病毒粒子；对ＮＤＶ有明显的干扰作用；分离株的传代物都有明显的致鸡胚矮小化作用；动物回归感 染死亡鸡肾脏病变明显，表现肾脏肿大、花斑肾现象，输尿管内充塞大量尿酸盐；无直接血凝性，经ｌ％胰酶处理后可 凝集鸡红细胞；分离株对乙醚和氯仿敏感；采用反转录一聚合酶链式反应（ＲＴ—ＰＣＲ）对分离毒株进行扩增，结果均扩增 出特异Ｎ基因核酸片断，以上结果表明该分离病毒为ＩＢＶ。将该分离株制备灭活苗进行免疫试验，试验保护率为 １００％．结果显示了该分离株具有良好的免疫效力。 关键词：鸡传染性支气管炎病毒；分离；鉴定；免疫试验 鸡传染性支气管炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）是由鸡传 离到１株ＩＢＶ，命名为ＩＢＶ ＹＱ株，并进行了相关的实验免 染性支气管炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）引起 疫研究。 鸡的呼吸道、泌尿生殖系统甚至消化系统的一种急性、高度 １材料和方法 接触性传染病。因ＩＢ血清型众多，不同血清型之间交叉保护 １．１鸡胚及雏鸡９～１１日龄ＳＰＦ鸡胚和１日龄ＳＰＦ雏 效果差，变异株的不断出现和流行，是造成鸡群免疫失败的 鸡，购自山西隆克尔生物制药有限公司；１日龄ＳＰＦ雏鸡由 原因。对ＩＢ的防治主要是防止病原入侵鸡群，减少应激因 本实验室隔离饲养。 素和提高鸡的免疫力。而免疫仍是防制ＩＢ的主要手段，由于 １．２材料及试剂鸡新城疫Ｌａ Ｓｏｔａ株，购自山西隆克尔生 ＩＢＶ变异较快，ＩＢＶ血清型的研究也需跟上ＩＢＶ变异的速 物制药有限公司，批号０２０７０３；ＩＢＶ标准阳性抗原，ＩＢＶ肾型 度，才能有效预防。由于研制相同血清型的弱毒苗需要较长 阳性血清，均由山西省畜牧所馈赠；ＡＭＶ反转录酶、ＲＮＡ酶 的时间，较实用的方法是活苗加本地分离株制作的灭活苗一 抑制剂、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ、Ｍａｒｋｅｒ（ＤＥ２０００）、ＲＮＡ提 起免疫，能有效预防ＩＢ；本研究从山西疑似ＩＢ的病料中，分 取试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司。 １－３病毒的分离及传代无菌取具典型临床症状的病鸡的 基金项目：山西省自然科学基金（２００７０１１０８３０）；山西高校科 肺、气管和。肾脏，将病料１：４加灭菌生理盐研磨成乳状，反复 技研究开发项目（２００６１ １０１４） 冻融三次，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清，０．２２ ｍ微孔滤膜 通讯作者：闫芳（１９６６～），山西平遥人，博士后，副教授，主要 除菌。尿囊腔接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚，接种０．２ｍＵ胚，３７￣Ｃ孵 从事动物传染病的诊断与防治研究。 育，弃去２４ｈ内死去的鸡胚，４８ｈ后，无菌收集尿囊液再接种 ６．２酶标仪读数将反应板放置在酶标仪中先对空白孑Ｌ和 疫吸附试验主要是在宰前活体采血检测，能够作到及早发现 阴性对照孑Ｌ进行读数，然后逐孔依次进行读数，凡试验样本 病猪，及早治疗，减少发病率，同时一方面避免了宰后检出患 血清ＯＤ值高于阴性血清ＯＤ值２倍以上者，判为阳性。 病生猪销毁造成的经济损失。一方面避免了宰后误检，漏检， ７试验分析 杜绝了病害肉上市。 按照国家农业部《动物疫病监测方法》对本地待宰生猪 ８试验结论 按１０％抽样，共对５６０头生猪进行宰前采血，应用酶联免疫 通过此方法对活体猪快速、准确的监测，即时发现、即时 吸附试验检测猪囊虫，宰后剖检咬肌、腰肌、肩胛外侧肌与酶 治愈，可以降低本地区猪囊虫、旋毛虫的发病率，减少感染， 标检测结果进行对照。５６０头生猪宰前采血应用酶联免疫吸 保护人体健康，促进畜牧业健康发展。 附试验检测旋毛虫，宰后采集隔肌角压片检验，宰前与宰后 ９猪囊虫病的治疗推荐用药 检验结果进行对照。通过试验宰前采血应用酶标检测猪囊 （１）吡喹酮１００ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ加适量面粉和水调成丸剂口服； 虫、旋毛虫结果与宰后检验结果完全一致。检出猪囊虫阳性 间隔７ｄ重复给药１次。（２）丙硫咪唑８０ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ，分３—４次 生猪３头，占检验总数的０．６％。旋毛虫全部为阴性。酶联免 拌人饲料中喂服。 ２００９年第４期 ・・目墨鍪蟊圜・・
