ＨＥＩＬＯＮＧＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＹ Ｊｕｎ．２０１０．Ｖｏ１．３３ Ｎｏ．３ ・２１・ 红花注射液对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用 商宇，王建杰，马淑霞，杨玉，王晓灵 （佳木斯大学基础医学院免疫教研室，黑龙江佳木斯１５４００７） 摘要：目的：本课题主要研究红花注射液对佐剂性关节炎大鼠（ＡＡ）的免疫调节作用。方法：模型制作第１５天，给予动物相 应药物治疗。治疗２ｏｄ后，大鼠心脏采血。取全血做ＴＣ亚群计数，留取血清用ＥＬＩＳＡ法测血清ＩＬ一１含量；取大鼠腹腔液涂 片，做巨噬细胞吞噬功能测定。结果：在红花注射液的作用下，佐剂性关节炎大鼠的巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率、ＣＤ Ｔ细 胞与ＣＤ＋Ｔ细胞比值及血清ＩＬ一１含量均显著降低。结论：红花注射液可以调节佐剂性关节炎大鼠过于亢进的免疫自稳功能， 其治疗效果与雷公藤甲素相仿。 关键词：红花注射液；类风湿关节炎；免疫调节 中图分类号：Ｒ５９３．２２；Ｒ２８５文献标识码：Ａ文章编号：１００８—０１０４（２０１０）０３—００２１—０２ 类风湿性关节炎（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种常见 数及ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ一１。 的自身免疫性疾病，以滑膜组织炎性增生，关节破坏为基本 ２．４．２ Ｔ细胞（ＴＣ）亚群测定 特点Ｌ１］。红花具有活血、散瘀、降压等功效，主要用于治疗跌 打损伤，对冠心病、血管栓塞性疾病等亦有一定的疗效。红花 取大鼠肝素抗凝血２ｍＬ，分离有核细胞，制备细胞悬液， 注射液（ｓａｆｆｌｏｗｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＳＩ）是红花的成分提取物。本实验 推片，固定，染色，在高倍镜下观察２００个淋巴细胞，计数 采用佐剂性关节炎（ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＡＡ）大鼠作为动物模 ＣＤ３ ＣＤ４ Ｔ、ＣＤ３ ＣＤ８ Ｔ细胞及计算ＣＤ４ Ｔ／ＣＤ８ Ｔ的 型，研究红花注射液对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用。 值。 １ 实验材料与动物 ２．４．３ 血清ＩＬ一１测定 １．１实验材料 ． 用ＥＬＩＳＡ法测定血清ＩＬ一１，按试剂盒说明书操作。 红花注射液，山西亚宝药业集团产品，含生药０．１ｇ／ｍＬ， ２．４．４ 巨噬细胞吞噬功能测定 ４℃冰箱保存备用。 大鼠腹腔注射５％鸡红细胞（ＣＲＢＣ）１ｍＬ。４０ｍｉｎ后，处 １．２ 实验动物 死大鼠，吸取腹腔液，制涂片，瑞氏染液染色，镜检，寻找巨噬 雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，体重（１８０士１５）ｇ，购于佳木斯大 细胞，计算巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数。 学动物实验中心 吞噬百分率一吞噬有ＣＲＢＣ的细胞数／１００个巨噬细胞 ×１００ ２ 实验方法 吞噬指数一１００个巨噬细胞中吞噬的ＣＲＢＣ／１００ ２．１ 动物分组 ２．５ 统计学处理 大鼠随机分为４组，每组１５只。依次为：正常对照组（Ｎ）， 数据以均数士标准差 士 ）表示表示，经正态性检验 模型对照组（Ｍ），雷公藤甲素治疗组（ＴＰ），红花注射液治疗 和方差齐性检验。若服从正态性和方差齐性，用单因素方差 组（ＳＩ）。 分析，两两比较用口检验；若不服从正态性和方差齐则采用 ２．２ 制备大鼠佐剂性关节炎模型 秩和检验。数据的分析采用用ＳＰＳＳ１３．Ｏ统计软件进行处理。 取液体石蜡、无水羊毛脂与卡介苗冻干粉，制备弗氏完 ３ 实验结果 全佐剂（ＦＣＡ）（卡介苗终浓度ｌｍｇ／ｍＬ）。除正常对照组外，各 ３．１ 模型观察 组大鼠于右后足跖皮内注射ＦＣＡ ０．１ｍＬ，每天１次，免疫 ＦＣＡ注射后的第３天，大鼠出现全身反应和明显的局部 ２５ｄ。 ２．３给予药物治疗［２。］ 急性炎症反应，表现为毛色暗黄无光、倦怠，注射部位红肿、 溃烂；第１Ｏ天大鼠发生全身广泛性炎症，表现为鼠尾、四肢均 ＴＰ组和ＳＩ组于造模第１５天开始给予动物药物治疗。方 出现红肿，体重下降。第２５天，大鼠后肢出现屈曲位畸形，活 式：尾静脉注射，每日１次，连续给药２０ｄ。剂量：雷公藤甲素 动明显受限，同时尾部出现炎性小结，提示佐剂性关节炎模 ０．０４ｍｇ／千克・只，红花注射液１５０ｍｇ／千克・只。Ｎ组与Ｍ组 型成立。ＴＰ组和ＳＩ组连续给药２０ｄ后观察，发现大鼠后肢肿 给予生理盐水（Ｏ．６ｍＬ／天・只）替代。 胀部位有所消退，提示治疗有效。 ２．４标本采集及指标检测 ３．２ 巨噬细胞吞噬功能测定 ２．４．１ 标本采集 见表１。 治疗２０ｄ后，处死大鼠。取大鼠心脏血，用于ＴＣ亚群计 （上接第２Ｏ页） Ｓｉｍｕｌ ｔａｎｅｏｕｓ ｃｙｓｔｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｕｒｅｔｅｒｏｓｃｏｐｙ ｆｏｒ ｄｉｓｔａｌ ｕｒｅｔｅｒ ｃａｌ ｃｕｌ ｉ ＮＩＵ Ｗｅｎ—ｂｉｎ，ＷＡＮＧ Ｃｈｕｎ—ｌｉｎｇ，ＱＩＮ Ｙｉｎｇ—ｃｈｕｎ，ＱＩＮ Ｗｅｎ—ｂｏ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ。ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｊｉａｍｕｓｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ １５４００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔ０ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｃｙｓｔｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｕｒｅｔｅｒｏｓｃｏｐｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔ— ｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｔａｌ ｕｒｅｔｅｒ ｃａｌｃｕｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄａｔａ ｏｆ ２６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｔａｌ ｕｒｅｔｅｒ ｃａｌｃｕｌｉ ｔｒｅａｔｅｄ ｓｉｍｕｌｔａｎｅ— ＯＵＳ ｂｙ ｃｙｓｔｏｓｃｏｐｙ ｕｒｅｔｅｒ ｍｅａｔｏｔｏｍｙ ａｎｄ ｕｒｅｔｅｒｏｓｃｏｐｙ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ．Ｒｅｓｕｌ ｔｓ：Ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｏｆ ｃａｌｃｕｌｉ ａｎｄ ｏｂ－ ｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ２６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｓｔｅｎｏｓｉｓ，２２ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｆｏＵｏｗｅｄ ｕｐ ｆｏｒ １— ２４ ｍｏｎｔｈｓ（ｍｅａｎ ６ ｍｏｎｔｈｓ），ａｎｄ ｖｅｓｉｃｏｕｒｅｔｅｒａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｏｎｅ ｐａｔｉｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａ— ｎｅｏｕｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｓｔｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｕｒｅｔｅｒｓｃｏｐｙ ｆｏｒ ｄｉｓｔａｌ ｕｒｅｔｅｒ ｃａｌｃｕｌｉ ｉＳ ｓａｆｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｕｒｅｔｅｒｓｃｏｐｙ；ｃｙｓｔｏｓｃｏｐｙ；ｕｒｅｔｅｒ ｃａｌｃｕｌｉ ・２２・ 表１ 各组大鼠巨噬细胞吞噬功能比较（ 士 ，ｎ一１５） 黑龙江医药科学２０１０年６Ｂ第３３卷第３期 进的ＣＤ４ Ｔ细胞可以通过分泌炎性细胞因子促进ＲＡ的发 生发展。在本次实验中，模型组大鼠ＣＤ４ Ｔ细胞／ＣＤ８ Ｔ细 结果表明，红花注射液可以降低大鼠巨噬细胞吞噬指数 和吞噬百分率，Ｍ组高于Ｎ组（Ｐ＜ｏ．０５），ＴＰ组低于Ｍ 组，有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；ＳＩ组与Ｍ组比较有显著性 差异（Ｐ＜０．０５），ＳＩ组与ＴＰ组比较无显著性差异 （Ｐ＞０．０５）。 ３．３ ＴＣ亚群测定 见表２。 由表可知，Ｍ组与Ｎ组比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）， ＴＰ组与Ｍ组比较有显著差异（，＜０．０５），ＳＩ组与Ｍ组比 较有显著差异（Ｐ＜０．０５），ＳＩ组与ＴＰ组比较无显著性差异 （Ｐ＞０．０５）。 表２ 大鼠ＴＬＣ亚群计数及比值（ 士ｓ，ｎ＝１５） 胞的比值明显升高，说明ＡＡ大鼠适应性细胞免疫应答出现 紊乱。通过治疗，ＳＩ组大鼠ＣＤ４ Ｔ细胞／ＣＤ８ Ｔ细胞降低， 说明红花注射液可以下调ＡＡ大鼠过于亢进的ＣＤ４ Ｔ细胞 应答，纠正ＡＡ大鼠的细胞免疫紊乱。巨噬细胞是重要的固 有免疫应答细胞。ＲＡ患者巨噬细胞被过度活化并释放炎症 介质，引起局部炎症，尤其是关节滑膜炎。在本次实验中，模 型组大鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数明显升高，表明 巨噬细胞处于高度活化状态。通过治疗，ＳＩ组大鼠巨噬细胞 的吞噬百分率和吞噬指数降低，说明红花注射液可以抑制 ＡＡ大鼠巨噬细胞过度活化，纠正ＡＡ大鼠的固有免疫紊乱， 减少自身免疫应答对机体的损伤。ＩＬ一１是十分重要的促炎 细胞因子，具有多方面作用，如：【４］ＩＬ一１可以刺激成纤维细 胞和软骨细胞产生胶原酶和ＰＧ，导致骨和软骨破坏。取血清 测定ＩＬ一１，模型组大鼠ＩＬ一１明显高于正常，而ＴＰ组及ＳＩ 组的ＩＬ一１相对于模型对照组均有所降低，提示红花注射液 具有抑制ＡＡ大鼠炎症细胞因子合成分泌的作用，其疗效与 雷公藤甲素类似。综上所述，红花注射液可以从免疫细胞与 免疫分子两个方面纠正ＡＡ大鼠所存在的严重免疫紊乱。红 花注射液与雷公藤甲素的效果没有明显差别。雷公藤甲素是 种具有很强的免疫抑制作用的中药提取物，对ＲＡ有确切 一３．４红花注射液对佐剂性关节炎大鼠外周血ＩＬ一１的影响 见表３。 的疗效；但副作用大，了它的应用。红花注射液的副作用 很小，因此可以考虑作为雷公藤甲素的替代药物单独应用或 表３ 各组大鼠外周血ＩＬ一１的比较（ 士５，ｎ：１５，ｐｇ／ｍＬ） 分组 Ｎ组 Ｍ组 ＴＰ组 ＳＩ组 与其他药物配伍，用于纠正ＲＡ患者的免疫紊乱，作为一种 辅助药物应用于临床。 参考文献： ［１］王勇民，明章银，吴基良．红花注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤 的影响口］．咸宁医学院学报，２０００，１４（４）：２４８－２４９ ［ｚ］杨琴，杨桂枝，王蕾．雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠的作用 ［Ｊ］．四川解剖学杂志，２００６，１４（１）：１１－１２ ［３］高飞，吴小候，罗春丽．红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗 效及机制研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００６，３１（２１）：１８１４－１８１６ ｌＬ一１ ３０．Ｏ２士６．７９ ７９．１３士１１．７５ ５０．３９４－８．７４ ４９．３５±７．９ｌ 结果经分析可知，Ｍ组与Ｎ组比较有显著差异 （Ｐ＜０．０１），ＴＰ组与Ｍ组比较有显著差异（Ｐ＜０．０１），ＳＩ 组与Ｍ组比较有显著差异（Ｐ＜０．０１），ＳＩ组与ＴＰ组比较 无显著性差异（尸＞０．０５）。 ４ 讨论 ［４］Ｖｕｏｌｔｅｅｎａｈｏ Ｋ，Ｍｏｉｌａｎｅｎ Ｔ，Ｈａｍａｌａｉｎｅｎ Ｍ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ ａｎｄ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｃａｒｔｉｌａｇｅ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｅｇｏｎｏｕｓ ＩＬ一１ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２００３，３２（１）： １９—２４ Ｔ细胞介导适应性细胞免疫应答，正常人ＣＤ４ Ｔ细胞 与ＣＤ８ Ｔ细胞处于平衡状态，而ＲＡ患者往往发生偏移。亢 作者简介：商宇（１９８０￣）男，黑龙江佳木斯人，讲师，在读硕士。 （收稿Ｅｌ期：２００９—１２—２９） Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌ ａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓａｆｆｌ ｏｗｅｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｒａｔｓ ＳＨＡＮＧ Ｙｕ，ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ一 ，ＭＡ Ｓｈｕ—ｘｈ２，ＹＡＮＧ Ｙｕ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｌｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ １５４００７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ （ＡＡ）ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｗｅ ｂｅｇａｎ ｔｏ ｇｉｖｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｏ ｒａｔｓ ｏｎ Ｄａｙ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ｂｕｉｌｄ— ｉｎｇ．Ｗｅ ｔｏｏｋ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒａｔ ｈｅａｒｔ ａｆｔｅｒ ２Ｏ—ｄａｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｓｓａｙ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂ— ｇｒｏｕｐ．Ｂｌｏｏｄ ｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ＩＩ 一１ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ－－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｒａｔ ｐｅｒｉ— ｔｏｎｅａｌ ｆｌｕｉｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｍｅａｒ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｉ ｔｓ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓａｆｆｌｏｗｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ａｎｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ＣＤ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｃｄ＋Ｔ ｃｅｌｌ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ＩＩ 一１ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ．Ｃｏｎｃｌ ｕｓｉｏｎ：Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｏｆ ＡＡ ｒａｔｓ，ａｎｄ ｉｔｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ Ｔｒｉｐ： ｔｏｌｉｄｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
