p62和mtor在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

p62和mTOR在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

张晋源

（山西医科大学附属太钢总医院，山西太原030003）

【摘要】目的探讨自噬相关蛋白SQSTM1/p62（p62）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在非小细胞肺癌

选择80例确诊为NSCLC的患者组织标本（肺癌组），40例肺癌同侧远端

肺癌组p62和mTOR的表达显著高于肺泡组和支气管组

（NSCLC）中的表达及临床意义。方法

正常肺泡组织（肺泡组），42例正常支气管黏膜标本（支气管组），采用免疫组化检测各组织标本中p62和mTOR的表达，并分析其与临床病理特征的相关性。结果（P<0.05）。结论的发生与发展。

【关键词】非小细胞肺癌

P62

mTOR

自噬

ExpressionandclinicalsignificanceofP62andmTORinNSCLC

ZhangJinyuan.TaigangGeneralHospitalAffiliatedtoShanxiMedicalUniversity，Taiyuan，Shanxi030003【Abstract】Objective

ToexploreexpressionofP62andmTORofAutophagy-relatedProeinsinNSCLC.Methods

Immunohistochemicalstainningwasappliedtodetectexpressionandcorrelationofclinicopathologicalparameterofp62andmTORin80samplesofNSCLC（lungcancergroup）、40samplesofnormalalveolartissuesofdistalipsilateral（alveolargroup）and42samplesofmucousmembraneofnormalbronchus（bronchialgroup）.Results

Theexpressionof

p62andmTORwassignificantlyhigherinlungcancergroupthanthatinalveolargroupandbronchialgroup（P<0.05）.P62andmTORExpressionwaspositivelycorrelatedwithcancerofdifferentiationandclinicalstaging（P<0.01）.P62expressionwaspositivelycorrelatedwithmTORexpression（P<0.05）.Conclusionp62andmTORshowectopicexpressioninNSCLCandtheytakesynergisticptomotionofautophag，thentheypromoteoccurrenceanddevelopmenofNSCLC.

【KeyWords】NSCLCP62

mTORAutophag

DOI：10.19435/j.1672-1721.2020.02.004

肺癌作为目前最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居所有恶性肿瘤之首，5年生存率为15%左右

[1]

（P<0.05），p62和mTOR的表达与肿瘤分化和临床分期相关（P<0.01），p62与mTOR表达水平呈正相关

p62与mTOR在非小细胞肺癌组织中异常表达，二者协同促进自噬的发生，最终促进NSCLC

中男56例，女24例；年龄55岁~85岁，平均年龄（71.7±3.5）岁，包括低中分化癌56例，高分化癌24例；TNM分期：早期62例，晚期18例。为进行对照研究，同时留正常肺泡及支气管组织，其中肺泡组40例、支气管组42例。本研究项目经过我院医学伦理委员会批准，患者均签署了关于该研究的知情同意书。

1.2

试剂

上海研生生化试剂有限公司提供兔抗人

，在所有肺癌

中，约80%~85%为非小细胞肺癌。肺癌患者早期症状不明显，80%以上的患者就诊时已处于晚期，手术、放化疗在临床中的应用受到。探寻治疗肺癌的新方法或新靶点成为目前迫切需要解决的问题。

真核细胞吞噬降解自身成分需要通过溶酶体来完成

[2]

，有

很多过程通过以上方式进行，自噬就是其中一种。自噬在肿瘤的发生、发展过程中，在不同阶段发挥的作用不同，早期阶段，通过各种途径抑制肿瘤发生与发展；在晚期阶段，经过复杂的过程后最终促使肿瘤发展与转移。自噬相关蛋白SQSTM1/p62（p62）与泛素化蛋白质结合后可进入自噬小体内，并降解，故可以作为一种标记蛋白，检测自噬活性大小。经过研究同样证实，雷帕霉素靶蛋白（targetofrapamycin，mTOR）也可以作为一种自

4]

噬活性的标记蛋白[3，。本研究通过检测p62和mTOR的表达水

mTOR单克隆抗体；上海江莱生物科技有限公司提供p62抗体；武汉博士德生物工程有限公提供免疫组化试剂盒、DAB试剂盒。

1.3

方法

术后取部分新鲜组织标本10%液

固定，石蜡包埋切片；脱蜡处理；抗原修复；抗体封闭；PBS清洗3次，每次5min；37℃孵育二抗（1∶1000）；配置DAB工作液，避光反应10min；脱水透明，中性树脂封片，即可显微镜下观察。

1.4

统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件分析数据，

计数资料采用字2检验，相关性分析采用Spearman法，P<0.05为差异有统计学意义。

22.1

结果

3组p62与mTOR表达情况比较

p62阳性染色为

平，分析其表达与临床病理参数的相关性，以期为肺癌患者寻找治疗新靶点提供理论依据。

11.1

资料与方法一般资料

选择2018年1月—2019年1月在我院

经肺穿刺活检术或气管镜下组织活检术明确诊断为非小细胞肺癌（NSCLC）患者80例（术后均未进行化疗或放疗），其

作者简介：张晋源，女，硕士，住院医师。基层医学论坛2020年1月第24卷第2期

棕色颗粒，分布于细胞质和细胞核中。mTOR蛋白表达于阳性细胞的细胞质内，呈棕黄色颗粒。55例p62染色阳性，p62在

155论著

NSCLC组中的表达阳性率为68.75%（55/80）；肺泡组及支气管组表达阳性率分别为17.5%（7/40）、23.81%（10/42）。p62在NSCLC组中表达水平显著高于肺泡组及支气管组（字2=40.739，28.861，P<0.01），在肺泡组及支气管组之间表达差异无统计学意义（字2=1.965，P>0.05）。mTOR蛋白在NSCLC组中的表达阳性率为61.25%（49/80）；肺泡组及支气管组表达阳性率分别为12.5%（5/40）、19.05%（8/42）。mTOR蛋白在NSCLC组中表达水平显著高于肺泡组及支气管组（字2=41.574，29.3，P<0.01），在肺泡组和支气管组之间表达差异无统计学意义（字2=1.296，P>0.05）。

2.2

不同临床特征2个指标表达情况比较

低中分化组

p62的阳性表达明显高于高分化组（P<0.01）；晚期组p62的阳性表达明显低于早期组（P<0.01）。对于mTOR蛋白，其表达在低中分化组高于高分化组（P<0.01），晚期组低于早期组（P<0.01）。见表1。

表1

临床病理特征分化程度低中分化高分化TNM分期早期晚期

6218

48（77.42）7（38.）

5624

42（80.36）13（54.17）

8.814

<0.05

41（66.13）8（44.44）

p62与mTOR表达与NSCLC临床病理特征的关系例数

p62阳性

例（%）

的发生常伴有线粒体功能紊乱。对于人体抗氧化过程来说，NRF2-Keap1通路发挥着重要的中介作用。有实验证实，当p62升高时，可与NRF2-Keap1结合，激活NRF2靶基因并直接促使肿瘤的发展[12]；同时过量的p62蛋白表达可激活一种潜在的与肿瘤转移相关的基因———NF-кB基因，通过信号通路中NF-кB依赖的转录过程导致肿瘤转移。另有研究也提示，p62通过细胞有丝细胞转化[13]。肿瘤的激活可活化mTOR与PI3K，而mTOR通过抑制Atg1激酶活性，最终

15]

阻碍自噬过程[14，。

本研究证实肺癌组中p62、mTOR蛋白高表达可抑制肿瘤的分化过程，并与临床分期相关，促进肿瘤的进展。表现为肿瘤分化程度越高，p62表达越低；分化程度越高，mTOR表达越低。说明二者均可促进肿瘤的发生与发展，对于预后判断起着重要的作用。本研究证实p62和mTOR存在明显相关性，证明两者在肿瘤的发展过程中起着互相促进的作用，并对自噬过程起到抑制的作用，最终导致肿瘤的进展，疾病恶化。

P值

<0.05

字2

6.2

P值

<0.05

mTOR阳性字2

5.094

综上所述，自噬蛋白p62与mTOR蛋白在NSCLC中明显升高，二者协同促进自噬的发生，最终促进NSCLC的发生与发展。

参考文献

42（80.36）7（29.17）

3.762

<0.05

[1]SUZ，WANGK，LIR，etal.OverexpressionofRBM5inducesautophagy

inhumanlungadenocarcinomacells[J].WorldJSurgOncol，2016，14：57.doi：10.1186/s12957-016-0815-7.[2]

KUMAA，MIZUSHIMAN.Physiologicalroleofautophagyasanintracellularrecyclingsystem：withanemphasisonnutrientmetabolism[J].SeminCellDevBiol，2010，21（7）：683-690.

[3]WIRAWANE，LIPPENSS，VANDENBERGHET，etal.Beclin1：arolein

membranedynamicsandbeyond[J].Autophagy，2012，8（1）：6-17.[4][5]

ALAYEVA，HOLZMK.mTORsignalingforbiologicalcontrolandcancer[J].JCellPhysiol，2013，228（8）：1658-16.

MIZUSHIMAN，KOMATSUM.Autophagy：renovationofcellsandtissues[J].Cell，2011，147（4）：728-741.

[6]李乐兴，戴汉川.细胞自噬的分子机制研究进展[J].中国细胞生

物学学报，2015，37（2）：263-270.[7][8][9]

KANGR，ZEHHJ，LOTZEMT，etal.TheBeclin1networkregulatesautophagyandapoptosis[J].CellDeathDiffer，2011，18（4）：571-580.CHEND，GAOF，LIB，etal.Parkinmono-ubiquitinatesBcl-2andregulatesautophagy[J].JBiolChem，2010，285（49）：38214-38223.MATSUNAGAK，SAITOHT，TABATAK，etal.TwoBeclin1-bindingproteins，Atg14Landrubicon，reciprocallyregulateautophagyatdifferentstages[J].NatCellBiol，2009，11（4）：385-396.[10]

KOMATSUM，KUROKAWAH，WAGURIS，etal.Theselectiveautophagysubstratep62activatesthestressresponsivetranscriptionfactorNrf2throughinactivationofKeap1[J].NatCellBiol，2010，12（3）：213-223.[11]

SEIBENHENERML，DUY，DIAZ-MECOMT，etal.Aroleforsequestosome1/p62inmitochondrialdynamics，importandgenomeintegrity[J].BiochimBiophysActa，2013，1833（3）：452-459.[12]

MOSCATJ，DIAZ-MECOMT.p62atthecrossroadsofautophagy，apoptosisandcancer[J].Cell，2009，137（6）：1001-1004.

基层医学论坛2020年1月第24卷第2期

2.33

p62与mTOR的相关性讨论

p62与mTOR蛋白阳性表

达之间呈正相关（r=0.394，P<0.05）。

自噬是细胞一种重要的自我降解，对于细胞生长而言至关重要。细胞要想生存，自噬是一个必然的步骤，该步骤包括细

[5]

胞质内的多种有效成分的降解，降解递质为溶酶体。最终目的为各种营养成分发挥再次利用，当各种应激反应启动时，机体的细胞可以积极应对。巨自噬、微自噬及分子伴侣介导的自噬是自噬发挥作用的三种形式。自噬在机体多种疾病，如神经系统疾病、肿瘤性疾病、心功能不全以及传染病中，都扮演者至关重要的角色[6]。

mTOR复合体和非mTOR复合体是参与机体自噬的两种重要复合体，当自噬发生时mTOR通路可以使其抑制，而非

8]

mTOR复合体可以使其激发[7，。前者主要包括IP3负、磷

酸肌醇信号传导通路以及Ca++-calpain-Gsa信号通路等；后者则主要通过磷酸化Atg13，改变Atg13和Atgl的结合状态来影响自噬体的形成，其调节主要受PI3K通路、AMPK、p53的影响[9]，最终达到促进肿瘤发生，抑制自噬发生的作用。p62首先和泛素化蛋白相结合，然后与LC3II结合从而形成自噬复合体，同时携带机体即将淘汰、衰老的细胞和蛋白等进行降解，

[10]

最终抑制自噬过程。

本研究结果提示，p62与mTOR在肺癌组标本中明显高于肺泡及支气管（P<0.05），提示p62与mTOR在肺癌患者中高表达。SeibenhenerML等人[11]的研究发现，p62广泛存在于线粒体中，在维持线粒体的正常形态和功能中发挥重要作用，而肿瘤

156论著

[13]LINARESJF，AMANCHYR，GREISK，etal.Phosphorylationofp62

bycdk1controlsthetimelytransitofcellsthroughmitosisandtumorcellproliferation[J].MolCellBiol，2011，31（1）：105-117.[14]

WIRAWANE，VANDENBERGHET，LIPPENSS，etal.Autophagy：

[15]

forbetterorforworse[J].CellRes，2012，22（1）：43-61.

LIUEY，RYANKM.Autophagyandcancer-issuesweneedtodigest[J].JCeSci，2012，125（10）：2349-2358.

（收稿日期：2019-10-05）

2组不同培养箱对辅助生殖临床结局的影响对比

林运鸿

康跃凡

杜生荣

郑备红*（福建省妇幼保健院，福建福州350001）

【摘要】目的法

比较同一型号的2组不同培养箱对体外授精胚胎移植技术（IVF-ET）临床结局的影响。方

收集2017年3月—2018年11月在本中心进行取卵周期的患者临床资料，符合纳入标准的取卵周期数分

2号培养箱的正常受

别为1号培养箱117个和2号培养箱114个。对比2组培养箱的正常受精率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率、D5囊胚冷冻个数、D6囊胚冷冻个数、移植2D3临床妊娠率和种植率。结果

精率显著高于1号培养箱（81.33%vs74.4%，P<0.05）；2号培养箱移植2D3的种植率显著高于1号培养箱（36.79%vs23.26%，P<0.05）；2组培养箱的D3优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率、D5囊胚冷冻个数、D6囊胚冷冻个数、移植2D3临床妊娠率比较无统计学差异（P>0.05）。结论能存在差异，应定期做好质控分析。

【关键词】辅助生殖

培养箱

受精率

种植率

影响

Comparativeanalysisoftwogroupsofincubatorsontheclinicaloutcomeofassistedreproduction

LinYunhong，KangYuefan，DuShengrong，etal.TheFujianProvinceMaternityandChildren鸳sHospital，Fuzhou，Fujian350001

【Abstract】Obiective

Tocomparetheclinicaloutcomesofinvitrofertilizationandembryotransfer（IVF-ET）

FromMarch2017toNovember2018，theclinicaldataofthe

intwodifferentincubatorsofthesametype.Methods

同一型号的培养箱之间的临床结局可

patientsinourcenterwerecollected.Thenumberofcyclesinaccordancewiththeinclusioncriteriawere117inNo.1incubatorand114inNo.2incubator，respectively.Thenormalfertilizationrate，D3highqualityembryorate，blastocystformationrate，highqualityblastocystformationrate，D5blastocystfreezingnumber，D6blastocystfreezingnumber，ET2D3clinicalpregnancyrateandimplantationratewerecomparedbetweenthetwogroups.Results

The

normalfertilizationrateinNo.2incubatorwassignificantlyhigherthanthatinNo.1incubator（81.33%vs.74.4%，P<0.05）；theimplantationrateofET2D3inNo.2incubatorwassignificantlyhigherthanthatinNo.1incubator（36.79%vs.23.26%，P<0.05）.TherewerenosignificantdifferencesinD3high-qualityembryorate，blastocystformationrate，high-qualityblastocystformationrate，D5blastocystfreezingnumber，D6blastocystfreezingnumberandET2D3clinicalpregnancyratebetweenthetwogroups（P>0.05）.Conclusion

【KeyWords】Assistedreproduction

Theremaybedifferencesin

Influence

clinicaloutcomesbetweenthesametypeofincubator.Qualitycontrolanalysisshouldbedoneregularly.

IncubatorFertilizationrateImplantationrate

DOI：10.19435/j.1672-1721.2020.02.005

在辅助生殖过程中存在短时间的体外操作，而胚胎的体外发育过程是在培养箱中进行的，培养箱保障了胚胎体外发

2]育过程所需的适宜温度、气体、pH、渗透压和湿度等条件[1，。

对比分析对生殖中心的质控分析很有必要，因此我们开展了此项研究。

11.1

资料与方法研究对象

收集2017年3月—2018年11月在我院

目前，各生殖中心所使用的培养箱不尽相同，同一个生殖中心往往会同时使用多种类型的培养箱进行胚胎的体外培养，培养箱对胚胎发育及其临床结局的影响一直是胚胎学家们关注的问题。大部分文献报道[3-5]主要对比分析不同类型或型号的培养箱对胚胎发育及临床结局的影响，但针对同一型号的培养箱之间的临床结局比较少见报道。本次研究主要采用桌面台式培养箱进行胚胎培养，同一型号桌面培养箱之间的

*

进行取卵周期的患者临床资料，纳入标准：①女方年龄≤38岁；②获卵数≥5个；③授精方式为体外授精胚胎移植技术（IVF-ET）；④使用的培养液为Vitrolife培养液（瑞典）；⑤在1号和2号培养箱培养。符合条件的取卵周期数分别为1号培养箱117个、2号培养箱114个。2组的女方年龄、男方年龄、女方体重指数（BMI）、基础卵泡刺激素（FSH）、基础促黄体生成素（LH）、Gn天数、Gn总量、获卵数、取卵日男方精液量、精子浓度、精子总活动率和精子前向运动率比较无统计学差异

157通讯作者：郑备红

作者简介：林运鸿，男，硕士，主管技师。基层医学论坛2020年1月第24卷第2期