PH1498 Western Blot一抗二抗去除液实验使用方法与步骤

WesternBlotStrippingBuffer（Neutral）

CatalogNo：PH1498Size：250mLStoreat4℃去除液简介

WesternBlot一抗二抗去除液（Strippingbuffer）可以充分去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行WesternBlot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。本品经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用3次，每次大约只需15-30min，并且在室温条件下就可以进行。本类型Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。试剂保存

4℃保存，一年有效，如长期不用请放置-20℃保存。使用参考

1.在完成Western化学发光检测后，用蒸馏水或TBST缓冲液漂洗5-10min。2.弃蒸馏水，加入适量的Western一抗二抗去除液（中性），至少需把膜完全覆盖。在摇床上室温缓慢漂洗25min左右（漂洗时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，可以延长漂洗时间至30min）。3.弃Western一抗二抗去除液，用蒸馏水或TBST缓冲液洗膜3次，每次10min，室温振摇。4.剥脱后的膜加入封闭液进行封闭，进行下一轮的WB实验。注意事项

1、用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。2、本Western一抗二抗去除液仅适用于PVDF膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。3、使用ECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。孵育内参抗体GAPDH后用ECL发光液曝光20s。用本试剂剥脱25min后孵育内参抗体β-actin,ECL发光液曝光20s