冀中能源峰峰集团总医院
______ 年度新技术、新项目
可行性论证报告书
新技术项目名称:25羟基维生素D3定量测定
试剂盒（胶体金免疫层析）
项目负责人： 彭吉芳 _________________ 科
室： 检验科 _____________
审核日期： _2017.05.7 ________________
冀中能源峰峰集团总医院医务部
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见附件1
新技术、新项目的预见风险及处理预案
由于本产品在使用过程中与人体无直接作用，进行试验时操作者严格按照说明书进行操作, 故无不良事件及副作用。
该技术、项目涉及的药品、设备情况
胶体金法铁蛋白定量检测试剂及其配套使用的免疫层析结果判读记录仪。
附件1
编号：VD-S-01
试剂盒标准操作程序
（2015年第I版）
产品名称：25羟基维生素D3定量测定试剂盒
（胶体金免疫层析法）
方
法：胶体金免疫层析法
普迈德（北京）科技有限公司
目录
1. 2.
名称 引言 原理 组成 样品采集和处理 样品的采集 样品的处理 仪器 操作步骤 结果判读 技术参数 重复性 最低检出量 检出符合率 贮存条件 有效期 参考文献 技术
3. 服务4. 5. 5.1 5.2 6. 7. 8. 9. 9.1 9.2 9.3 10. 11. 12. 13.
1. 名称
通用名称： 25羟基维生素 D3 定量测定试剂盒（胶体金免疫层析法）
2. 引言
普迈德 25 羟基维生素 D3 定量测定试剂盒能够快速准确诊断人全血、 血清 和血
浆中的 25 羟基维生素 D3 含量，用于辅助临床早期诊断佝偻病以及骨质疏 松症，适合在基层医院、 诊所以及体检中心等单位使用， 不仅可以大大缩短检测 时间，满足临床医生的需要，同时也使大规模的人群维生素 D 营养状况普查成 为可能，为患者争取更多更快的治疗时间，大大降低患者发病风险。
3. 原理
本试剂盒的测定试剂采用抗体抗原反应及免疫层析分析技术， 测定试剂含有 预先包被在聚酯膜上的金标记的鼠抗人 25-OH-VD3（25羟基维生素D3）单克隆 抗体以及固定于膜上测试区（T）的25-OH-VD3和质控区（C）的相应羊抗鼠多 克隆抗体。测试时，将标本滴入检测卡条加样孔（S）内，如是阴性标本，金标 记的鼠抗人25-OH-VD3 （25羟基维生素D3）单克隆抗体与预先包被在聚酯膜上 测试区（T）的25-OH-VD3结合，从而在测试区（T）出现一条紫红色条带。如是 阳性标本，则标本中的25-OH-VD3与预先包被在聚酯膜上金标记的鼠抗人 25-OH- VD3单克隆抗体结合，从而使金标记的鼠抗人25-OH-VD3与预先包被在聚酯膜上 测试区（T）的25-OH-VD3结合量减少，测试区（T）线颜色变浅或消失。无论标 本中是否存在25-OH-VD3 一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区
（C）内所呈现的紫红色条带判断是否有足够样本，层析过程是否正常的标准， 同时也作为测定试剂的内控标准。测试区（
T）紫红色条带的深浅与样本中的
25-OH-VD3的含量相关，通过胶体金免疫层析分析仪扫描检测区，获得相应的光 学信号，
然后通过内置的标准曲线把信号转换为
25-OH-VD3的浓度。
4. 组成
4.1试剂盒：20人份试纸条、1份说明书、样品缓冲液（O.1mol/L的Tris-HC缓 冲液， pH 值 7.0, 装量: 4ml）。
4.2 每人份试纸条： 1 份检测卡、 1 支滴管和 1 包干燥剂 4.3定量检测卡：样品垫、
纤维素膜（T线包被25-OH-VD3 C线包被羊抗 鼠多克隆抗体）、金标垫（包被胶体金标记的鼠抗人25-OH-VD3单克隆抗体）、吸 水纸、塑料载板。
5. 样品采集和处理
5.1 指尖末梢全血
应在无菌情况下采集全血。取 80ul 稀释液于离心管，备用；利用采血针和 微量采血吸管，采取指尖血20ul，置于有缓冲液的离心管内，混匀。此样 品请立即检测。
5.2 静脉血 应在无菌情况下采集全血。 5.2.1 血浆/ 血清
标本采集完后，应尽快分离出血清 /血浆，避免溶血。已经溶血的标本不能 使
用。不应将标本在室温（18〜25C）条件下长时间放置。血浆/血清标本在2〜 8°C条件下可以保存三天，血浆样本需加入抗凝剂。检测前样本必须恢复至 室温（18〜
25C），混合均匀后方可使用。 5.2.2 全血
标本采集完后，请立即使用。全血标本加入抗凝剂后，在 以
保存三天。检测前样本必须恢复至室温（18〜25C），混合均匀后方可使用。
2〜8 C条件下可
6. 仪器
PMDT8000胶体金免疫层析分析仪 计时器、标本收集容器、离心机
7. 操作步骤
7.1 从原包装试剂袋中取出检测试纸，在 1 小时内应尽快使用，特别是高度潮 湿的环境
和温度高于30C，应尽快使用。
7.2 将试剂盒放置在干净的水平台面上。
指尖末梢全血标本：在加样孔中加入 100uL步骤5.1中备好的样品，开始 计时。 血清或血浆标本：用样品缓冲液1:10稀释（10ul标本加90ul稀释液），在 加样孔中加入100卩L稀释后的标本，开始计时。
全血标本：用样品缓冲液 1:5 稀释（ 20ul 标本加 80ul 稀释液），在加样孔中 加入100卩L稀释后的标本，开始计时。
7.3 扫描产品的二维码 （内含标准曲线 ）后，将反应 15 分钟的试剂卡，放入胶体 金
免疫层析分析仪读取结果， 20 分钟后读取的结果无效。
8. 结果判读
特别提示：反应结束后，应立即判读结果。
8.1当检测结果显示为“〉100ng/mL”时，表明样本中25羟基维生素D3高于 检测范围上
限；当测试值高于线性上限时， 如需准确定值， 可用缓冲液稀释， 重复检验，该样本浓度为测试浓度值乘以稀释倍数。最高稀释 2 倍。
8.2 25羟基维生素D3浓度＜10ng/mL，说明25羟基维生素D3缺乏。
8.3 25羟基维生素D3浓度在10〜30ng/mL之间，说明25羟基维生素D3不 足。 8.4 25羟基维生素D3浓度在30〜80ng/mL之间，说明25羟基维生素 D3足 够。
9. 技术参数
9.1 精密度：
9.1.1批内精密度：＜ 1% 9.1.2批间精密度：＜ 1% 9.2 空白限
空白限应不高于 5ng/mL
9.3 线性范围
在5ng/mL〜100 ng/mL的范围内，线性相关系数应不低于
0.990。
9.4 准确度
回收率应在85%〜115%之间。
9.5 分析特异性
含浓度不低于100ng/mL维生素D3的零浓度25羟基维生素D3样本，检 测结果不高于 5ng/mL。
10. 贮存条件
原包装应储存于4〜30C,避光干燥处。
11. 有效期
18个月。
12. 参考文献
[1]
MF H． Vitamin D deficiency[J] ．N Engl J Med，2007，357(3)：266-281．
[2] Vieth R ，Bischoff-Ferrari H，Boucher BJ，etal．The urgent need to recommend all
intake of vitamin D that is effective[J] ．Am J Clin Nutr．， 2007， 85(3) ：9-650 ．
[3] Pittas AG，Dawson-Hughes B，Li T，etal． Vitamin D and calcium intake in
relation to type 2 diabetes in women[J] ． Diabetes care， 2006， 29(3) ： 650-656.
[4] Rammos G， Tseke P， Ziakka S． Vitamin D，the renin-angiotensin system， and
insulin resistance[J]． Int Urol Nephrol ，2008， 40(2) ：419-426 ．
13. 技术服务 有关产品技术咨询和投诉，请与厂商客户服务部联系。 电话： 01 0-57277459
