山东大学实验报告
姓名王赛赛 系年级 组别 同组者 陈燕红 王梓 科目 生物化学实验 题目 生化实验总结 学号 201014140103
生化实验总结
一、实验感想：
本学期的十个生化实验，让我们学到了不少新的实验技能和实验操作方法及实验原理。
酵母RNA的提取及核酸的定量测定让我们第一次真正的接触到了对于核酸的一些提取、处理、及研究的方法，例如：利用RNA能溶于碱性溶液的原理来用稀碱法提取RNA，其中对于样品的处理，以及提取完毕之后碱的中和、乙醇提取、乙醚滤干等操作方法都是以前没遇到过的。在核酸的定量测定试验中，我们同样巩固了分光光度计的使用方法。在蛋白质含量测定的过程中，我们学习了两种方法，一种是folin-酚试剂法，一种是经典的凯斯氏定氮法。前者利用folin-酚和酪氨酸和色氨酸的结合来测定蛋白质含量，同时我们也是第一次接触到了紫外分光光度计，以及标准曲线的绘制。利用标准曲线来测定样本的蛋白质浓度。后者实验原理比较复杂，但总体来说就是将蛋白质中的有机氮转化成无机氮（硫酸铵），然后再与碱液反应，通过测量氨气的释放量来间接测得蛋白质的含氮量，然后再求蛋白质的含量。这次实验我们学会了使用凯氏定氮仪，并且明白了其基本工作原理。本仪器使用方便，效果良好。使用的过程中，由于要长时间做大量的重复测定，由此也锻炼了我们坚忍不拔的实验精神，磨练了意志，同时也经过反复的练习而增强了有关该实验的实验操作技能，如何缓慢加液防止倒吸，如何控制蒸汽发生器防止暴沸，如何按照顺序严格的加入试剂，以及如何进行滴定等，通过该实验，对这些技能都有了进一步的了解。在醋酸纤维素薄膜电泳的实验中，我们主要学习到的是在复杂的实验材料处理的过程中如何保持清醒的头脑，以及完整的思路，这样才能把实验做好，并且做的很快。该实验要配制缓冲液、漂洗液、染色液、透明液，从薄膜的制作，到点样，处理、电泳等要经过一系列复杂的实验操作，每一步都很重要，每一步的处理时间，处理程度都要靠自己去把握，
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最后还要经过漂洗、冷风吹干，最后的处理是要及其小心的，否则会把薄膜弄破，或者出现皱缩，不平整。如果前期点样不好，或者染色、电泳过程中稍有不慎，便的不好较好的电泳条带，出现拖尾，或断续的现象。因此，这个实验尤其考验我们的操作能力和细心水平。酶性质实验是我们接触到为数不多的一个定性实验。
我们从中学会了对于定性测量的一些处理方法，例如：如何确定最佳ph？如何确定ph梯度比较合适？如何确定最佳保温时间？这些问题都从试实验中得到了解答。最后是通过颜色反应来判断最适宜ph，准确判断颜色深浅是一个方面，更重要的是颜色指示剂的加入量要绝对控制好，如果加的太多，则会使所有的试管颜色偏深，甚至都变成黑色，如果加的太少，那么染色就太浅，变色不明显，所以，太深太浅都不适于颜色梯度变化的观察。由此可知，在以后的类似试验中尤其要控制指示剂的加入量，力求达到一个最佳的颜色梯度。肌糖原酵解作用实验中，我们不仅学到了鉴定糖酵解作用的原理和方法，还学到了在有关组织代谢实验时应该注意的一些问题。本实验将肌糖原转变成乳酸，然后通过测定乳酸的生成量来反应糖原的酵解。实验最后要经过颜色反应来判断是否有乳酸生成，该反应相当灵敏，所以实验仪器要严格的洗干净。记得我们这次实验时，第一次由于没有洗净试管，所以导致空白组也出现了颜色反应，后来老师让用浓硫酸洗过一次试管，然后才得到了正确的实验结果，这是在这次试验中收获最大的地方。在纤维素酶活力的测定试验中，第一次学习到了空白对照实验，知道了空白对照实验的作用，同时对于标准曲线和分光光度计的使用已经比较熟练了。薄膜层析和柱层析实验都是分离实验，两种层析方法比较学习，对于层析又有了进一步的认识，柱层析的实验中，最主要的还是层析柱的制作，和点样，加样量不要过大，过大，分离条带过宽，如果层析柱不够长，各组分不易分开，易同时洗脱下来（本实验只分离一种色素，不存在此问题）；加样量过少，色带不是很清楚，不易观察，效果不好。最后，菲林热滴定定糖法实验，该实验也要做空白测定，将样品液换
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成蒸馏水，正确理解空白测定的作用，然后就是热滴定过程，该滴定不同于以往的滴定实验，要趁热滴定，并且要保持滴定时间一直，防止空气中的氧气对实验结果造成影响，还有，提前加入葡萄糖的作用，是为了减少滴定过程中的加入量，缩短滴定时间，增强滴定准确度。最后还有在滴定时候颜色的变化，通过亲自的观察对颜色的变化深有体会。
通过这学期的一系列实验，我们学到了好多实验技能，同时也发现了不少的问题，以及理论知识的缺乏，我以后会更加努力，不断成长。
二、72型分光光度计
1、72型分光光度计原理：
72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组 成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。它的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺 上直接读出透光率的值。
2、为什么要做空白?
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分光光度计测的是溶液的总体吸光度，而待测溶液中除了待测物质外还有其他的一些杂质等，会给实验带来一定的误差，用空白组调0.可以消除由于溶液本身的吸光性质给实验带来的 影响，确保吸光度的差异仅仅是由于溶液中待测物质浓度的不同而引起的。
3、T为什么只能用1-100的数，而不能用超过100的数？
因为他表示透光度，在调节100%之后最大的透过率即使空白的100，其他的只能比空白小，超过100表示光没有透过样本而直接穿过空当，所以不能用超过100的。
