第３２卷第３期 ２０ｌ１年５月 佛山科学技术学院学报（自然科学版） Ｊｏｕ ｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ “Ｉ Ｉ１） Ｖ【）１．：｛２ ＮＯ．３ Ｍ ｌＹ ２０１，ｌ 文章编号：Ｊ ００８—０ｌ ７１（ ｌ ４）０３—００７０—０３ 甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织 化学染色效果比较 黄勋福，毛荣军，韩福兰，吴燕杏，曾 敏，谢 乐 （佛山市中医院病理科，广东佛山５２８ＯＯ０） 摘要：目的 通过对甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果进行对照观察．发现冰对蜡块与冰剩蜡 块对免疫组织化学染包效果的差异，为选择冰对蜡块与冰剩蜡块做免疫组织化学提供理论实践依据。方法 ３ 冰对蜡块与冰剩蜡块分别切片用ＥｎＶｉｓｉｏｎ法做ＴＴＦ一１，ＣＫｌ ９，Ｇ ｒＩ１—３，ＨＢＭＥ—１．ＴＰ（）．ＴＧ免疫生¨织化学染色。 结果 对 ＦＴＦ—１．ＣＫｌ ９．Ｇａｌ一３，ＨＢＭＥ一１，ＴＰＯ，ＴＧ免疫组织化学染色结果的背景．定位进行分析．冰对蜡块与 冰剩蜡块免疫组织化学染色各项指标阳性率完全一致。结论 冰对蜡块与冰剩蜡块分别做免疫组织化学染色 结果无明显差别．在没有冰剩蜡块或冰剩蜡块不符合要求时选择冰对蜡块做免坡组化．结果对诊断无影响。 关键词：甲状腺；免疫组织化学；冷冻 中图分类号：Ｒ５８ｌ 文献标志码：Ａ 随着冰冻切片技术的普及，甲状腺手术做术中冰冻诊断在佛山市中医院（以下简称本院）已形成常 规。把术中冰冻切片后剩余的冷冻组织（简称冷对），经脱水后制成的蜡块（称为冷对蜡块）和冷冻切片取 材剩余、未冷冻的组织（简称冷剩）经脱水后制成的蜡块（称为冷剩虫｝｛块），分ｊｊＩｊ作车ｌｊ火指怀的见ｌｊ建纰织化 学染包，以探¨‘两利咄ｆ｝块对免疫组织化学染色是＿否有影响。 ｌ 材料与方法 １．１ 材料 收集２０１ ０年１月至２ｏ１３年６月期间本院外科送检的甲状腺组织， 求组织有足够的量．经脱水包 埋后包含有冷对蜡块和冷剩蜡块，筛选出符合条件的甲状腺组织共３，５０例 １．２试剂 免疫组织化学试剂一一抗，二抗，ＰＢＳ，ＣＢＳ，ＤＡＢ显色剂均购自广州市康顺医学科技有限公司。 １．３ 方法 （１）送检新鲜甲状腺组织试验按如下步骤操作。做冰冻取材，大小为２．０ ｃｎｌ×２．０ ｃｎｌ×０．３ ｃｎｌ，要 求取材厚薄均匀，用（ ）（ Ｔ包埋进行冷冻切片，待诊断报告发出后从冷冻切片饥取出，（）（ Ｔ溶化后放人 ４ 中性甲醛液固定。 （２）剩余组织按大２．０ ＣＩＩ１×２．０ ｅｍ×０．２ ｃｍ取材１～４块放入４ 巾性 醛液 定。 （３）一起常规脱水、包埋。 （４）冷对蜡块和冷剩蜡块分别切一张３ ｍ片，免疫组化片裱片，烤片、脱蜡至水洗。 （５）３ Ｈ Ｏ。氧化１ｏ ｍｉｎ，高压抗原修复，冷着后加一抗孵育１ ｈ，ＰＢＳ冲洗３次每次２ ｒａｉｎ，加二抗 收稿臼期：２０１ ４－０１—１ ３ 作者简介：黄勋福（１ ９６５一），男，广东韶关人，佛山市中医院副主任技师。 第３期 黄勋福等：甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果比较 孵育３０ ｍ｛ｎ，ＰＢＳ冲洗３次每次２ ｒａｉｎ，ＤＡＢ显色，镜下控制，水洗。一一一一９ ３ ） Ⅲ ｍ 亿 （６）苏木精对比染色、脱水、透明、封固。 ２ 结果 阳性信号呈棕黄色， ｒＴＦ一１，ＣＫ１９，Ｇａｌ一３，ＨＢＭＥ一１，ｋｉ一６７，ＴＧ位于细胞的细胞核／质／膜出现淡 黄色至棕黄色为阳性，对３５Ｏ例甲状腺组织冰对蜡块与冰剩蜡块分别做免疫组织化学染色，染色结果采 用双盲法由３位有经验的病理医师、技师按背景染色，定位准确情况以及阳性强弱分３级进行评价，具 体的评价按以下标准进行。 （１）－ｔ－一＋＋。＋十＋为无背景染色，定位准确以及阳性表达强。 （２）＋＋。＋十为无背景染色，定位准确以及阳性表达较强。 （３）十。十为有少量背景染色，定位准确以及阳性表达不强。 本次试验的结果如表ｌ所示。 表１ ＴＴＦ一１．ＣＫ１ ９，Ｇａ１ ３，ＨＢＭＥ一１，ＴＰＯ，ＴＧ在甲状腺冻对蜡块与冻剩蜡块中的表达 抗体 ， ．．．… 堕壁 十＋ ＋＋＋ 阳性率／ ＋ —— — ３５０ ｌＯ０ ５２ ３５（） ４２ ｌ５ １ ｌ ２２ ｌ０ ３０ ３７ ２２ ３５０ １ ｌ １４ １ ５ ２Ｏ ８ ２９ ３３ ２０ ３５０ ４ ６ ３４ １１ ２６ ｌ０ ３９ ４ ２ ２６ ３５（） Ｉ ３８ ６２ ５０ ８０ ３３ ９７ １５（） ８０ ３５Ｏ ｌ ６５ １１０ ７５ １００ ４８ ｌ２７ １ ５５ ｌＯ０ ３讨论 冷冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种制片方法，广泛应用于术中 病 诊断，它不需经过固定、包埋和切片脱蜡后处理等步骤，组织没有收缩，保持了 有的组 ｛肜态。其 优点是操作时间短，大部分病例能获得明确诊断，为临床进一步的手术方案提供依据Ｌ１ Ｊ。冷冻 片还能 很好地保存组织抗原和酶的活性，为需要做免疫组化进一步研究提供了保障。 冰对蜡块即冷冻切片后剩余的组织制成的蜡块，冰冻过的组织由于经过冷冻切片，从切Ｊ－Ｉ‘机取出至 （）ＣＴ溶化，最后固定处理整个过程会造成抗原丢失，因而对免疫组化的背景、表达强度有一一定影响，反 互 映在本实验结果为阳性（＋～十＋）占７１ ～７７ 。 冷剩蜡块即冷冻切片取材剩余、未冷冻的组织，由于取材后组织马上用４ ｆ１ｊ性甲醛液固定，使细 胞的抗原得到最大限度的保存，因而对免疫组化的背景、表达强度的影响最小，反映在本研究结果为阳 性（＋＋～＋＋＋）占８１～８８％。 本研究结果表明，在甲状腺标本中，常检测的几个指标用两种蜡块做免疫组化阳性结果只表现为强 弱上有少许差别，没有出现一种蜡块阳性而另一种蜡块阴性或一种蜡块（＋）而另一种蜡块（十十十）的 情况。通过对表１冻对蜡块与冻剩蜡块多项免疫组化结果统计比较可知，二者阳性率完全…致，这一研 究结果与国内相关文献上报道的结果完全相符 。冻对蜡块的非特异性衿色要强：’：冻剩蜡块，冻对蜡块 的强度弱于冻剩蜡块。其原因可能与冻对蜡块经冷冻后未立即同定，部分抗原减 或丢失， 至组织自 溶，免疫组化结果表现为有肯景染色及强度减弱。本研究结果说 冻对蜡块、冻剩蜡块，邵叮做免疫组化 且结果无差别。 本研究对甲状腺微小癌的诊断有指导意义。在临床上有时会遇到标本太少全部做冰冻，此时只有冰 对蜡块而无冷剩蜡块，有时会遇到冰对蜡块有可疑病灶而冷剩蜡块无可疑病灶，而这两种情况需要做免 疫组化检查时冰对蜡块是唯一选择。本研究结果表明对甲状腺之外选掸冰对蜡块做免疫组化辅助诊断 同样有意义。值得注意的是，实际工作中，冰冻报告发出后，要求马上取ｆｊＩ冰冻组织，待包埋剂溶解完即 入４ 中性甲醛固定，注意不要用流水冲洗，尽可能避免抗原丢失影响染色结果。 ７２ 参考文献： 佛山科学技术学院学报（自然科学版） 第３２卷 ［Ｉ］谢丽做・周伶俐・王宗敏．冷冻切片免疫组织化学技术的应用体会［Ｊｊ临床与实盼病删学杂忠．２（）【Ｊ７．２：｛（１）：９ｌ一９２ ．［２ｊ刘庆华，黄琼，胡莉．等．乳腺癌冻对蜡块与冻剩蜡块免疫组织化学染色效果比较【＿Ｊ］．贵卅Ｉ睡约．２（）ｌ１．１｛５（７）：（；０１． 【责任编辑：任小平ｒｅｎｘｐｇＯ＠ｌ ６３．ＣＯｉｌ１１ Ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｙｒｏｉｄ ｐａｒａｆｆｉｎ－ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ｆｒｏｚｅｎ ｒｅｍｎａｎｔ ａｎｄ ｐａｒａｆｆｉｎ—－ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ｕｎｆｒｏｚｅｎ ｒｅｍｎａｎｔ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ＨＵＡＮＧ Ｘｕｎ—ｆｕ，ＭＡＯ Ｒｏｎｇ—ｊｕｎ，ＨＡＮ Ｆｕ—ｌａｎ， ＷＵ Ｙａｎ—ｘｉｎｇ，ＺＥＮＧ Ｍｉｎ，ＸＩＥ Ｉ．ｅ （Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｏｆｆｉｃｅ，Ｆｏｓｈａｎ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｈｏｓｐｉｔａ１Ｆｏｓ｝１ａｎ ５２８０Ｏ０．Ｃｈｉ【】ｒＩ） ．Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｙｒｏｉｄ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉ ｒＩ１ｂｅｄｄｅ（ｉ ｔｉｓｓｕｃｓ ｆｒｏｍ ｆｒ（）ｚｅｎ ｒｅｍｎａｎｔ ａｎｄ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ｕｎｆｒｏｚｅｎ ｒｅｍｎａｎｔ ｗｉｔｈ ｉｍｍ ＬＪｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｉ ｓｔａｉＩ１ｉｎ ，ｗｆｏｕｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓ Ｌｌｃｓ ｆｒｏｍ ｆｒ０ｚｃｎ ｒｃｎｌＪ１ａｎｔ ｅ ａｎｄ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ｕｎｆｒｏｚｅｎ ｒｅｍｎａｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｉｏｎ１ｕｎｏｌｒ１ ｓｔ（）ｃ１１ｃｎ１ｉｃ｛Ｉ１ ｓｔａ ｆ１ｉｎ ． Ｗｉｌｌ１ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ，ｉｔ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ Ｉ ｈｅｏｒｅｔｉｅａｌ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉＩ１ｌ【】ｅｄ（ｔｃｄ ｔｉ ｓ ｌｃｓ ｆｒｏ【１１ ｆｒｏｚｅｎ Ｆｅｎｌｎａｎｔ ａｎｄ ｐａｒａｆｆｉｎ—ｉｍｂｅｄｄｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒＯＦｌｌ ｕｎｆｒｏｚｅｎ ｒｅＩｎｎａｌｌｌ ｔｏ（１（Ｊ ｉｍｎ１ｕ【１（）ｈｉ ｌｏｃＩ１ Ｉｌｌｉｃａ１ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ 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